2.4.2 PCR-ARISA

用特定引物（表2-5）分别对样品中的细菌和古菌进行PCR扩增。产甲烷菌的PCR扩增条件为：1×PCR缓冲液，0.75 U的Taq DNA聚合酶（Thermo Start Taq DNA Polymerase kit），0.2 mmol/L核苷酸（A、G、C、T），0.40μmol/L引物，1.5 mmol/L MgCl2，最终体积25μL。古菌的PCR程序为：94℃5 min，35个循环（94℃1 min，54.8℃1 min，72℃2 min），72℃延伸10 min。细菌的PCR程序为：94℃5 min，35个循环（94℃1 min，54.5℃1 min，72℃2 min），72℃延伸10 min。反应在EP Silver循环变温加热器（Eppendorf AG，Hamburg，Germany）内进行。

表2-5 ARISA-PCR扩增中的引物序列(https://www.daowen.com)

采用Agilent DNA 1000试剂盒（Agilent Technologies Inc.，California，U.S.A）在Agilent 2100 Bioanalyzer（Agilent Technologies Inc.，California，U.S.A.）中进行PCR产物的ARISA分析。