二、人工培养

二、人工培养

病毒的严格细胞内寄生性决定病毒的培养必须用敏感的活细胞,根据病毒种类不同需选用不同的活细胞进行分离培养。病毒的分离培养方法主要有动物接种、鸡胚培养和细胞培养三种方法。

1.动物接种 对病毒生物学特性的研究可进行动物接种,常用的动物如鼠、兔、犬、牛和猴等。接种途径有鼻内、皮内、皮下、脑内、腹腔及静脉等。目前动物接种已很少用于临床实验,仅用于研究病毒的致病性、确定病原、进行疫苗和新药评价等。

2.鸡胚培养 有些病毒如流感病毒、痘病毒和腮腺炎病毒等可在鸡胚中进行分离培养,鸡胚的羊膜腔和尿囊腔可用于分离病毒。(https://www.daowen.com)

3.细胞培养 细胞培养是病毒研究、检测和疫苗制备最常用的方法。将离体活组织块或分散的组织细胞在培养瓶内生长,接种病毒后进行分离鉴定,常用于培养病毒的细胞有以下类型。①原代细胞:指来自动物或人的组织细胞,原代细胞对多种病毒的易感性高,主要用于标本中病毒的分离。②二倍体细胞:在传代过程中保持二倍体性质,可用于多种病毒的分离和疫苗的制备等。如人胚肺成纤维细胞WⅠ-26与WⅠ-38株等。③传代细胞:指能在体外持续传代的单细胞,由突变的二倍体细胞传代或人及动物肿瘤细胞建立的细胞株。常用于分离病毒的传代细胞有HeLa(人子宫颈癌)细胞、Vero(传代非洲绿猴肾)细胞、KB(人鼻咽上皮癌)细胞、Hep-2(人喉上皮癌)细胞和CHO(中国地鼠卵巢)细胞等。

对细胞培养的病毒,可根据其特征的不同选择不同的鉴定方法。如病毒所致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);空斑形成(plaque formation)用来测定病毒数量;红细胞吸附(hemadsorption)作为检测正黏病毒和副黏病毒的间接指标等。