【实训内容】
主要学习显微镜的使用及观察上皮组织的镜下形态。
一、显微镜的结构
1.机械部分。
(1)镜座与镜柱:显微镜的底座呈方形、马蹄形或圆形,其上方直立的柱形突起为镜柱。
(2)镜臂:显微镜的支柱,略呈弧形,是手握持的部分。
(3)镜筒:连在镜臂的前上方,镜筒上端装有目镜,下端装有物镜转换器。
(4)物镜转换器(旋转器):可自由转动,盘上有3~4个圆孔,是安装物镜部位。转动转换器,可以调换不同倍数的物镜,当听到“咔”的一声时,表示转换到位,方可进行观察。
(5)载物台:放置切片的平台,中间有一个透光孔便于光线通过,上方还有切片夹和推进器。切片夹可用来固定切片,推进器则用来左右、前后移动切片。
(6)焦距调节螺旋:显微镜上装有粗准焦螺旋和细准焦螺旋,大螺旋(粗调手轮)为粗准焦螺旋,小螺旋(微调手轮)为细准焦螺旋。有的显微镜粗细螺旋装在同一轴上,有的则分开安置。通过粗准焦螺旋可上下移动载物台,调节物镜与载物台之间的距离,调节幅度较大,通常用在低倍镜时,可先迅速找到物像。通过细准焦螺旋也可上下移动载物台,调节物镜与载物台之间的距离,但调节幅度较小,多在运用高倍镜时使用,从而得到更清晰的物像。
2.光学部分。
(1)目镜:镜筒的上端,镜头上一般标有“5×”“10×”“15×”等放大倍数。
(2)物镜:旋转器的下方,镜头上一般标有“10×”(低倍镜)、“40×”(高倍镜)、“100×”(油镜)3种。
3.照明部分。
(1)聚光器:载物台的下方,能聚集光线、增强视野亮度。聚光器的后方一侧有升降旋钮,通过升降聚光器可调节视野亮度;底部还装有光圈,可开大或缩小,以控制进入视野光线的多少。
(2)光源:聚光器的下方,可通过亮度调节旋钮调节亮度。
二、显微镜的使用方法
1.取镜。取镜时,用右手握住镜臂,左手托住底座,保持镜体直立,不可歪斜。
2.放镜。将显微镜放置在实训台上时,动作要轻,使镜臂朝向自己,离实训台边沿10 cm左右。
3.对光调节旋转器至低倍镜时可听到“咔”的一声轻响。双眼对准目镜,打开聚光器底部光圈,调节聚光器并转动亮度调节旋钮调节亮度,直至视野的亮度适宜为止。
4.观察。
(1)先用肉眼观察切片是否完好,观察组织在切片上所处位置。将需要观察的组织切片正放到载物台上,用切片夹固定切片,调节推进器,把切片中有标本的部分移到透光孔上。(https://www.daowen.com)
(2)用低倍镜观察,双眼通过目镜观察,同时旋转粗准焦螺旋,当视野中出现物像时,改用细准焦螺旋调节,直到看清物像。
(3)在低倍镜下找到物像后,再转换成高倍镜观察,同时调节细准焦螺旋,直到看清物像。
(4)如果高倍镜观察后仍需放大,可先下降载物台,调节螺旋器转换成油镜。在切片上滴加1滴镜油,调节螺旋器,上升载物台,侧面观察,使油镜镜头直接与油滴接触。双眼观察,同时旋转细准焦螺旋,直到看清物像。观察结束后,需用二甲苯擦拭干净镜头与切片。
5.整理。观察结束后,下降载物台取下切片,显微镜擦拭干净后,将物镜转成“八”字形,同时把聚光镜降下,以免物镜和聚光镜发生碰撞危险。
6.注意事项。
(1)搬动显微镜要慎拿轻放,使用显微镜要严格遵守规程。
(2)观察时应同时睁开两眼。右手书写者,以左眼从接目镜观察,以右手操纵粗、细调节器。用右眼和右手配合进行绘图或文字描述。
(3)显微镜必须经常保持清洁。机械部分可用纱布或绸布擦净;光学部分(反光镜除外)只能用擦镜纸轻轻擦拭,严禁用手或其他物品擦拭,以防污损。
(4)油镜使用后,应立即用擦镜纸蘸取少量清洗剂将镜头擦净。
(5)显微镜部件不得拆卸或互相调换,若有故障,应立即报告指导教师进行处理,不得自行修理。
(6)显微镜用毕,将显微镜恢复原样(转动旋转盘,使载物台中央的圆孔或低倍镜置于镜筒下方;转动调节轮,使载物台降至最低,罩上袋子),放回原处。
(7)由于制片关系,在视野中可能出现多个细胞重叠在一起、模糊不清或细胞折边等现象,因此,需寻找分离的单个完整的细胞进行观察。
(8)打扫实训室卫生前,必须将显微镜放入柜中,以免灰尘沾污。
三、上皮组织切片的观察
1.观察单层柱状上皮。
(1)肉眼观察小肠上皮切片,找到标本一侧有紫蓝色锯齿状结构,即为小肠黏膜部分。
(2)低倍镜下可见黏膜面有许多指状突起,为绒毛。绒毛表面有一层细胞,其细胞单层排列,为单层柱状上皮;柱状细胞间夹有空泡状结构,为杯状细胞。
(3)调至高倍镜下观察,可见细胞呈高柱状,单层排列,境界不清,核长卵圆形,长轴与细胞长轴一致,位于细胞基底部,胞质染成红色。杯状细胞胞质呈空泡状,核位于胞质下方,多为三角形,染色深呈紫蓝色。
2.观察变移上皮。
(1)低倍镜下可在膀胱的腔面找出一层染色较蓝的上皮。
(2)调至高倍镜下观察,可见空虚时的膀胱上皮。上皮细胞层次较多,各层细胞形态也不同:基部的呈立方状或矮柱状;中间数层呈倒梨形或多边形;近表面的细胞体积大呈立方形,有的含2个核,着色深。扩张时的膀胱上皮变得很薄,只有2~3层细胞,细胞呈扁平或不规则形。