A群链球菌测定

六、A群链球菌测定

链球菌属(streptococcus)是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。常将链球菌属按溶血现象分为α-溶血(草绿色)链球菌(α-hemolytic streptococcus)、β-溶血(溶血性)链球菌(β-hemolytic streptococcus)、γ-溶血(非溶血性)链球菌(γ-hemolytic streptococcus)3类。α-溶血链球菌致病力弱,为上呼吸道的正常寄生菌;γ-溶血链球菌为口腔、鼻咽部及肠道的正常菌群,通常为非致病菌;β-溶血性链球菌为链球菌感染中的主要致病菌。或延用Lancefield血清学方法进行分群(A、B、C、D、F、G等18个群),对人类有致病力者90%为A群,A群链球菌又称化脓链球菌(pyogenic streptococcus),A群链球菌不耐热(55~60℃,30min即可杀死),易被各种常用消毒药杀灭,但对各种自然因素却有一定的抵抗力。在痰、渗出物及动物排泄物中可生存数周,在尘埃中无日光照射时可生存数日,广泛分布于自然界,从水、尘埃、乳汁、健康人的鼻咽部、人及动物粪便中皆可检出。

A群链球菌也称溶血性链球菌,该菌能产生溶血毒素,对人类的致病力强,人类的链球菌感染绝大多数由A群链球菌引起。A群链球菌感染主要引起三类疾病。①化脓性感染:主要有扁桃体炎、急性咽炎或喉炎、支气管炎、肺炎、丹毒、蜂窝织炎、坏死性筋膜炎、链球菌毒素休克综合征(STSS)、淋巴管炎、产褥热等。坏死性筋膜炎是细菌通过破损的皮肤伤口进入深部皮下组织,引起广泛性肌肉和脂肪坏死。STSS则表现为上呼吸道感染、高热、咽喉痛、皮疹、肢体剧痛、坏死性筋膜炎和肌炎、休克、多脏器功能衰竭等严重症状。②毒素性疾病:产生红疹毒素的菌株可引起猩红热,临床表现为发热、咽峡炎、全身弥漫性皮疹和疹退后皮肤脱屑等。③非化脓性感染:链球菌感染后,引起的变态反应可引起人体组织或器官的损害,形成变态反应性疾病。如风湿热、急性肾小球肾炎。

对A群链球菌的治疗可首选青霉素。此外,头孢菌素、大环内酯类、万古霉素也是临床治疗链球菌感染的选择药物。对青霉素过敏者可改用红霉素、林可霉素;对新生儿脑膜炎患者,大剂量青霉素或氨苄西林应用疗效均较好。无论选用哪种药物,疗程不应少于10d。

A群链球菌的实验室检查方法有分离培养、抗链球菌“O”试验、胶乳试验、抗链球菌脱氧核糖核酸酶B(AD-Nase B)反应、抗链球菌透明质酸酶(AHy)等。传统的分离培养、抗链球菌“O”试验的方法操作烦琐、费时,不适合快速检测,而抗链球菌“O”快速胶乳试验是A群链球菌诊断的一种快速检测方法。链球菌溶血素(streptolysin)有溶解红细胞、杀死白细胞及毒害心脏的作用,主要有“O”和“S”两种。溶血素“O”能破坏白细胞和血小板,对心脏有急性毒害作用,使心脏骤停。溶血素“O”抗原性强,感染后2~3周,85%以上病人产生抗“O”抗体,病愈后可持续数月甚至数年,可作为新近链球菌感染或可能风湿活动的辅助诊断。

【检测原理】 抗链球菌溶血素“O”(ASO)快速胶乳试验。在试验板上,取一滴病人血清(预先做连续稀释)与一滴反应试剂(胶乳颗粒用链球菌溶血素“O”包被),旋转混匀,读取结果。若病人血清ASO滴度≥200U/ml,则发生凝集,连续稀释血清观察凝集现象,可用于半定量检测。

【适应证】 血清中ASO的测定,用于链球菌感染的诊断。

【标本采集】 经离心获得新鲜血清标本,贮于2~8℃、48h内使用,时间过长必须冰冻贮存,溶血、脂血及污染血清标本不可使用。

【操作方法】 定性试验。

1.试剂使用前,预置达室温。

2.轻轻混匀胶乳试剂。

3.核对阴性和阳性对照。

4.在反应板孔中加一滴未稀释血清(50μl)。(https://www.daowen.com)

5.然后加一滴胶乳试剂在血清中。

6.轻轻摇动使其充分混匀,2min观察结果。阴性和阳性对照同上法操作。

【结果判读】

1.凝集出现 ASO>200U/ml,阳性。

2.无凝集出现 ASO<200U/ml,阴性。

3.半定量试验 血清以生理盐水(0.9g/100ml蒸馏水)倍比稀释。

【临床意义】

1.人体感染化脓性球菌后在1~3周后,ASO可出现阳性,感染3~6周后抗体滴度达峰值。风湿热病患者应监测ASO的变化,观察病情是否复发。抗“O”值增高,提示有过溶血性链球菌感染。因此,凡由此菌感染所引起的疾病(如猩红热、丹毒、急性肾炎等)会使抗“O”值增高。由于抗“O”与血沉的变化均无特异性,即使病人抗“O”、血沉都增加情况下,对活动性风湿病的诊断,仍应结合临床表现来考虑。

2.某些与溶血性链球菌无明显关系的疾病,抗“O”值也可增加。如少数肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织疾病、亚急性感染性心内膜炎以及有些过敏性紫癜等病人,鉴别诊断时应结合临床资料综合分析。

3.高胆固醇血症、巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤病人,ASO也可增高。

【局限性】 新生儿ASO滴度常高于母体,而儿童却比成人低,学龄时达到成人水平。乳胶凝集试验检测ASO滴度在一定比例的病例中可产生假阳性结果。由于某些血清成分可中和链球菌溶血素的活性,如β脂蛋白、某些细菌因子以及肝病,因此,胶乳反应可产生假阳性。

【方法学优点】 检测方法简便、快速,定性、定量可同时进行。