乙型肝炎病毒检测
乙型肝炎（hepatitis B）是急性和慢性病毒性肝炎的一个重要类型，是由乙型肝炎DNA病毒组中的一种小DNA病毒引起的肝炎性损害。是世界各地肝硬化和肝癌的常见病因。乙型肝炎病毒（hepatitis B，HBV）属嗜肝DNA病毒科，是一个含有核酸和外壳的病毒颗粒，具有明显的种属及嗜肝特异性，可致持续性病毒感染。其基因组长约为3．2kb，是部分双链环状DNA。HBV分为A～H8个基因型，各基因型又分为不同的基因亚型。基因型A主要存在于白人，而基因型B和C主要在亚洲人群。A基因型慢性乙型肝炎患者对干扰素治疗的应答率高于D基因型；B基因型高于C基因型；A和D基因型又高于B和C基因型。HBV病毒蛋白质的基因产物含有4个部分重叠的开放读码框，即前S／S区、前C／C区、P区和X区。前S／S区编码大（前S1、前S2及S），中（前S2及S），小（S）3种包膜蛋白；前C／C区编码乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）及乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）；P区编码聚合酶；X区编码X蛋白。HBV容易发生基因变异。前C区和基本核心启动子的变异可产生HBeAg阴性变异株；P基因变异主要见于POL／RT基因片段；S基因变异可导致隐匿性HBV感染，表现为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性，但仍可有HBV低水平复制。
Hepatitis B的主要传染源为患者或无症状的HBsAg携带者。传播途径：经血或血制品、母婴、破损的皮肤和黏膜及性接触传播。粪便中不含有HBV或HBsAg，故不可能经粪-口途径传播。另外，蚊、臭虫等吸血昆虫在HBV传播中的作用尚无确实的证据。传播方式主要包括以下几种。①血液或血制品传播：主要是指被HBV污染的血液或血制品如白蛋白、血小板等输给受血者，引发的输血后肝炎。②母婴传播：是指子宫内经胎盘传播、分娩时通过软产道接触母血或羊水传播、产后接触母亲唾液或母乳传播。HBsAg及HBeAg均阳性的产妇几乎100%传播给婴儿，仅HBsAg阳性者其母婴传播率为45%～60%。还有一部分是父-婴传播，即男性感染者通过生殖细胞把病毒垂直传给子代。③破损的皮肤和黏膜传播：指使用未经严格消毒的医疗器械（如手术刀、牙钻、内镜、腹腔镜等）、日常生活与患者密切接触（如同用一个牙刷、毛巾、茶杯和碗筷）、使用被乙肝病毒污染的公共场所浴池及美容美发店的剃刀等，HBV均有可能通过破损皮肤及黏膜进入体内。④性接触传播：主要指与HBV阳性者性接触，特别是有多个性伴侣，感染概率更高。乙型肝炎的临床表现主要为乏力、食欲减退、恶心、呕吐、厌油、腹泻及腹胀，部分病例有发热、黄疸，约有半数患者起病隐匿，在查体中发现。肝功能异常，血清乙肝表面抗原、乙肝病毒去氧核糖核酸、去氧核糖核酸聚合酶均为阳性。
5%～10%的成年人和90%的新生儿在感染后没有能力清除病毒，因此就成为慢性肝炎的携带者。有1／3的HBsAg携带者中，慢性肝炎会在10～30年中转变为肝硬化。HBV感染呈世界性流行，该病无一定的流行周期，一年四季均可发病，但多属散发，近年发病率明显增长。世界卫生组织曾报道，全球约有20亿人曾感染过HBV，其中3．5亿人为慢性HBV感染者，全球每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国在世界上属于HBV感染的高发区，感染率一直较高，尤其是20世纪80年代中期以前出生的人，HBV的感染率超过了10%。我国约有2 000万人为慢性乙肝患者，每年约有28万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。由于乙肝病毒感染尚无理想的特异性治疗药物，因此乙肝已成为现阶段我国突出的公共卫生问题。
HBV对外界的抵抗力较强。对低温、干燥、紫外线和一般化学消毒剂均耐受。在37℃活性能维持7d，在-20℃可保存20年，100℃加热10min可使HBV失去传染性，但仍可保持表面抗原活性。HBV对0．5%过氧乙酸、5%氯酸钠和3%漂白粉敏感，可用它们来消毒。
判断HBV感染状况的指标为HBV血清学标志物，如HB-sAg、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、HBeAg、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）及抗-HBc IgM和HBV DNA等。前五项就是常说的乙肝两对半。目前上述标志物常用的检测方法有：化学发光免疫法、酶联免疫试验（ELISA）法、放射免疫法、免疫层析（胶体金）法。HBV血清学标志物的床边检测（POCT）使用的为免疫层析法，主要用于HBV感染的初筛及流行病学调查。现在国内有许多厂家都能够提供比较成熟的HBV血清学标志物免疫层析法的试剂。胶体金免疫层析技术是出现于20世纪80年代的一种独特的免疫学检测技术，其操作简单（不需专业人员操作）、快速（15min出结果）、特异性好（＞98%），结果清楚，易于判断和保存，且无需仪器。但由于目前只能进行定性测定，因此阻碍了这一技术的进一步应用。下面以杭州艾康生物有限公司提供的试剂为例对乙肝两对半的检测进行详细的阐述。
（一）HBsAg测定
HBsAg在HBV感染的检测中一直是最为重要的标志物，1963年由Blumberg在澳大利亚土著人血中发现，称为澳大利亚抗原（即“澳抗”），1974年正式定名为乙型肝炎病毒表面抗原。HBsAg为构型依赖型抗原，由226个氨基酸组成基本结构，它可刺激机体产生保护性抗体。其抗原决定簇中“a”是共同的，亚型决定簇d、y、w和r互为等位基因，由此得到8种不同亚型及2种混合型，最常见的血清型为adw、adr和ayw。我国绝大多数地区以adr为主，adw次之（长江以南省区与adr混存），新疆、西藏、内蒙古自治区的本地民族几乎全为ayw。亚型的检查有助于流行病学调查。
HBsAg是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在。HBV感染后，除急性期外，大部分人没有临床表现，但在血中可检出HBsAg，这类人通常称为HB-sAg携带者。血清HBsAg仅是感染乙肝病毒的标志，由于其在血液中多为不含病毒颗粒的空壳，所以不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱以及预后。HBsAg出现于患者感染乙肝病毒后1～6个月，即ALT升高前2～8周，至恢复期HBsAg滴度逐步降低乃至消失，抗HBs出现。如超过6个月仍不消失，患者可能变为慢性肝炎及慢性乙肝病毒携带者。HBsAg不仅存在于血液中，而且还存在于许多体液和分泌物中，如唾液、尿液、乳汁、胆汁、羊水、精液、阴道分泌物及胸腹水等。
【检测原理】 用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBsAg单克隆抗体（抗-HBs），应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆中HBsAg。测试时，血清／血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的待测物质，在测试区内（T）出现一条红色条带，则是阳性结果；如标本中不含有相应的待测物质，则测试区内（T）将没有红色条带，则是阴性结果。无论相应的待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【适应证】 定性测定人血清（浆）中的HBsAg，用于HBV感染的初筛及流行病学调查。
【标本采集】
1．标本收集时尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2．检测时应尽量使用新鲜的标本。
3．标本若不能及时送检，可在2～8℃冷藏3d。
4．长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
【操作方法】 见图5-2。
HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、Anti-HBc各占一个测试孔，五项标志物可以同时测出。
1．使用前将胶体金试剂板（试剂条）和血样标本恢复至室温。
2．从原包装锡箔袋中取出胶体金法试剂板（试剂条），在1h内尽快地使用。
图5-2 两对半加样测试板
3．用吸管吸取血清／血浆标本2～3滴，加入试剂板的相应加样孔中（或将试纸条插入血清／血浆标本中，注意血清／血浆标本液面不能超过试剂条的标记线）。
4．等待红色条带的出现，测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
【结果判读】 见图5-3。
图5-3 HBsAg检测结果判读
1．阳性 两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明标本中含有HBsAg。
2．阴性 仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。阴性结果表明标本中检测不出HBsAg。
3．无效 质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂板（条）已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是在规定观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】 血清HBsAg仅为HBV感染的标志，不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。
【局限性】
1．只适用于血清或血浆标本。
2．本法为初筛。阳性结果须用其他方法进一步确认。
3．本法为定性实验，不能确定其在标本中的具体含量。
4．测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
5．操作失误或者标本中存在干扰物质，有可能导致错误的结果。
【方法学优点】
1．操作简单、方便、快捷，15min即可出结果。
2．在检测临床甲肝、丙肝、类风湿和VDRL阳性血清标本时，结果没有交叉反应。
（二）抗-HBs测定
抗-HBs是对乙肝病毒的保护性抗体，常在乙型肝炎恢复后期出现阳性。此时HBsAg已转阴数月。对患者而言，它是乙型肝炎临床痊愈的标志。对疫苗免疫而言，它是免疫成功的标志，一般超过10U／L（国际单位）即有保护作用，低于此值，说明免疫失败，90%接受乙肝疫苗注射者的抗-HBs可转阳。血清中抗-HBs滴度越高，保护力越强，持续时间也越长。再次感染乙肝病毒后，抗-HBs可在2周内滴度明显升高。
一般情况下，血清中HBsAg和抗-HBs不同时存在，有极少数的特殊病例，可以在同一个血清样本中同时检出，这种现象可能是由以下情况引起：①在HBsAg清除和在急性乙肝发病过程出现抗-HBs时，可短暂同时出现两个指标，但它们的浓度都很低（免疫复合物）；②双重或再次感染两种不同血清型的乙肝病毒，两个指标都可以高浓度出现，并且可能保持很长一段时间；③HBsAg或抗-HBs出现假阳性（最常见原因）；④感染了具有免疫逃避的HBV变异型的病毒，这种情况主要见于经乙肝免疫或注射了乙肝球蛋白后。
【检测原理】 用HBsAg重组抗原和链霉亲和素-牛血清蛋白（BSA）包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBsAg重组抗原和生物素-BSA及其他试剂制成，应用双抗原夹心法原理，定性检测血清／血浆中抗-HBs。测试时，血清／血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的待测物质，在测试区内（T）出现一条红色条带，则是阳性结果；如标本中不含有相应的待测物质，则测试区内（T）将没有红色条带，则是阴性结果。无论相应的待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【适应证】 定性检测乙肝的免疫力及某些接触过乙肝病毒人群的传染性或危险性。
【标本采集】
1．标本收集时尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2．检测时应尽量使用新鲜的标本。
3．标本若不能及时送检，可在2～8℃冷藏3d。
4．长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
【操作方法】
1．使用前将胶体金试剂板和血样标本恢复至室温。
2．从原包装锡箔袋中取出胶体金试剂板，平置于台面上，在1h内尽快地使用。
3．用吸管吸取血清／血浆标本2～3滴，加入试剂板的相应加样孔中。
4．等待红色条带的出现，测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
注：抗-HBs检测，在某些厂家可以提供使用全血标本的试纸条。
【结果判读】 见图5-4。
图5-4 抗-HBs检测结果判读
1．阳性 两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明标本中含有抗-HBs。
2．阴性 仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。阴性结果表明标本中检测不出抗-HBs。
3．无效 质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂板已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】
1．抗-HBs是乙肝病毒表面抗原刺激人体免疫系统后产生的抗体，它是一种保护性抗体，也叫中和性抗体。它能中和乙肝病毒的感染力，保护人体免受乙肝病毒再度袭击。抗-HBs阳性至少可以说明三个问题：①乙肝病人到了恢复期，从此即将告别乙肝病毒感染；②既往感染过乙肝病毒，可能患过乙肝病，也可能是不知不觉中的隐性感染，但现在病毒已被清除，获得了对乙肝的免疫，即使有乙肝病毒侵入体内，也仍然安然无恙；③单纯抗-HBs一项阳性，是注射乙肝疫苗并免疫成功的标志，不会再感染乙肝病毒。
2．在乙肝抗体三个抗体中，以抗-HBs最为特殊，它与乙肝抗原（HBsAg、HBeAg和HBcAg）是对立关系，如果乙肝抗原阳性，其他抗原则为阴性；只有在抗-HBs产生的早期、属于不同亚型的HBV感染或由HBV的S基因变异所致的情况下，抗-HBs和HBsAg才会同时出现。
【局限性】
1．只适用于血清或血浆标本。
2．本法为初筛，阳性结果须用其他方法进一步确认。
3．本法为定性实验，不能确定其在标本中的具体含量。
4．测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
5．操作失误或者标本中存在干扰物质，有可能导致错误的结果。
【方法学优点】
1．操作简单、方便、快捷，15min即可出结果。
2．在检测临床HAV、HCV、RF和VDRL阳性血清标本中，结果没有交叉反应。
（三）HBeAg测定
HBeAg是Pre-C基因编码产生的含29个氨基酸的分泌型蛋白，是以隐蔽形式存在于核心颗粒中的可溶性蛋白，其一级结构与乙型肝炎核心抗原基本相同。它是出现病毒完整复制以及血清具有感染性的可靠标志。HBeAg阳性说明乙肝病毒在体内复制活跃，传染性强。在乙肝病毒感染后，HBsAg阳性的同时，或者其后数日可测得HBeAg，同时HBsAg在血液内的高峰期往往也是HBeAg的高峰期。HBeAg在肝炎症状出现后10周内逐渐下降，在HBsAg转阴前先转阴。急性肝炎中HBeAg的消失通常与丙氨酸氨基移换酶（ALT）的下降和恢复期出现有关，HBeAg持续12周以上提示HBV感染发展到慢性阶段。在慢性乙肝患者中，HBeAg阳转而抗-HBe转阴过程中临床上可出现明显的肝功能恶化。有时极个别情况下可见HBsAg阴性而HBeAg和抗-HBs阳性的模式，这很有可能是在病毒编码HBsAg的基因区发生了突变。
【检测原理】 用抗单克隆抗体（Eb1）包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBeAg单克隆抗体（Eb2），应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆中HBeAg。测试时，血清／血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的待测物质，在测试区内（T）出现一条红色条带，则是阳性结果；如标本中不含有相应的待测物质，则测试区内（T）将没有红色条带，则是阴性结果。无论相应的待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【适应证】
1．检测血清的感染力。
2．检测急性和慢性乙肝的感染性。
3．评价抗病毒治疗的成功性。
【标本采集】
1．标本收集时尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2．检测时应尽量使用新鲜的标本。
3．标本若不能及时送检，可在2～8℃冷藏3d。
4．长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
【操作方法】
1．使用前将胶体金试剂板和血样标本恢复至室温。
2．从原包装锡箔袋中取出胶体金试剂板，平置于台面上，在1h内尽快地使用。
3．用吸管吸取血清／血浆标本2～3滴，加入试剂板的相应加样孔中。(https://www.daowen.com)
4．等待红色条带的出现，测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
【结果判读】 见图5-5。
图5-5 HBeAg检测结果判读
1．阳性 两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明标本中含有HBeAg。
2．阴性 仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。阴性结果表明标本中检测不出HBeAg。
3．无效 质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂板已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】 HBeAg是HBV复制活跃的血清学标志，血清HBeAg阳性说明传染性强，密切接触者被传染的危险性较大。急性乙肝病人血清中持续阳性3个月以上，则有疾病慢性化倾向，可能会导致慢性肝炎、肝硬化。因此，HBeAg是估计感染乙型肝炎病毒预后和衡量其感染性强弱的一个重要标志。
【局限性】
1．只适用于血清或血浆标本。
2．本法为初筛，阳性结果须用其他方法进一步确认。
3．本法为定性实验，不能确定其在标本中的具体含量。
4．测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
5．操作失误或者标本中存在干扰物质，有可能导致错误的结果。
【方法学优点】
1．操作简单、方便、快捷，15min即可出结果。
2．在检测临床HAV、HCV、RF和VDRL阳性血清标本中，结果没有交叉反应。
（四）抗-HBe测定
抗-HBe为由HBeAg刺激肌体产生的非保护性抗体。在HBeAg转阴后数月可出现抗-HBe阳性。抗-HBe阳性预示患者体内病毒复制程度已降低或明显缓解，因此其传染性已显著或相对降低，但并非没有传染性，抗-HBe不是保护性抗体，这一点与抗-HBs不同。近年发现个别抗-HBe阳性，但乙肝病毒核糖核酸亦为阳性者的病情迁延不愈，这可能是乙肝病毒变异所致。
【检测原理】 用抗HBeAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的鼠抗HBeAg单克隆抗体，应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆中抗-HBe。测试时，血清／血浆标本滴入试剂板加样孔处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区（T）的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区（T）的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区内（T）将没有红色条带；阴性标本，测试区内（T）会出现明显红色条带。无论相应的抗体是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【适应证】 监测急性和慢性乙肝的感染性，检测血清的感染力。
【标本采集】
1．标本收集时尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2．检测时应尽量使用新鲜的标本。
3．标本若不能及时送检，可在2～8℃冷藏3d。
4．长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
【操作方法】
1．使用前将胶体金试剂板和血样标本恢复至室温。
2．从原包装锡箔袋中取出胶体金试剂板，平置于台面上在1h内尽快地使用。
3．用吸管吸取血清／血浆标本2～3滴，加入试剂板的相应加样孔中。
4．等待红色条带的出现，测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
【结果判读】 见图5-6。
图5-6 抗-HBe检测结果判读
1．阳性 仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果表明标本中含有抗-HBe。
2．弱阳性 质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有非常弱的红色条带出现。弱阳性结果表明标本中含有少量抗-HBe。
3．阴性 两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阴性结果表明标本中检测不出抗-HBe。
4．无效 质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂板已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】 抗-HBe阳性说明患者的传染性降低，病毒复制降低或缓解，但并非没有传染性。HBsAg和抗-HBe同时阳性的血清感染力通常较低。抗-HBe的产生和HBeAg的消失同时出现，在观察急、慢性乙肝的病程中有较好的预后价值，然而出现抗-HBe预后价值更高，而且在干扰素治疗过程中，也预示着疾病有所缓解。
【局限性】
1．只适用于血清或血浆标本。
2．本法为初筛，阳性结果须用其他方法进一步确认。
3．本法为定性实验，不能确定其在标本中的具体含量。
4．测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
5．操作失误或者标本中存在干扰物质，有可能导致错误的结果。
【方法学优点】
1．操作简单、方便、快捷，15min即可出结果。
2．在检测临床HAV、HCV、RF和VDRL阳性血清标本，结果没有交叉反应。
（五）抗-HBc测定
在HBV感染中，最早出现的特异抗体是抗-HBc。通常在HBsAg出现后3～5周，在典型肝炎症状出现前即可在血清中检出。发病时出现阴性可排除乙肝，在HBsAg消失后抗-HBs同时出现前（诊断窗），抗-HBc和抗-HBc IgM可能是急性乙肝的唯一指标。高滴度的抗-HBc常标志乙肝病毒正在复制，患者有传染性；而低滴度的抗-HBc表示乙肝病毒既往感染。感染后抗-HBc可持续存在数年至数十年，所以最适宜用于调查乙肝感染流行情况和某些人群乙肝感染的危险性。
【检测原理】 用抗HBcAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的鼠抗抗-HBc单克隆抗体，应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆中抗-HBc。测试时，血清／血浆标本滴入试剂板加样孔处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区（T）的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区（T）的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区内（T）将没有红色条带；阴性标本，测试区内（T）将会出现明显红色条带。无论相应的抗体是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【适应证】 诊断急性和慢性乙肝，调查特定乙肝的感染危险性或流行情况。
【标本采集】
1．标本收集时尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2．检测时应尽量使用新鲜的标本。
3．标本若不能及时送检，可在2～8℃冷藏3d。
4．长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
【操作方法】
1．使用前将胶体金试剂板和血样标本恢复至室温。
2．从原包装锡箔袋中取出胶体金试剂板，平置于台面上，在1h内尽快地使用。
3．用吸管吸取血清／血浆标本2～3滴，加入试剂板的相应加样孔中。
4．等待红色条带的出现，测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
【结果判读】 见图5-7。
图5-7 抗-HBc检测结果判读
1．阳性 仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果表明标本中含有抗-HBc。
2．弱阳性 质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有非常弱的红色条带出现。弱阳性结果表明标本中含有少量抗-HBc。
3．阴性 两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阴性结果表明标本中检测不出抗-HBc。
4．无效 质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂板已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】 见表5-2、表5-3。抗-HBc阳性较强表明乙肝病毒正在复制，患者有传染性；抗-HBc阳性较弱表示乙肝病毒既往感染；抗-HBc阴性可排除乙肝；低滴度的抗-HBc和抗-HBs同时存在时，是既往感染的标志；HBsAg阴性患者出现很强的抗-HBc阳性时，也预示着出现了慢性乙肝感染。
【局限性】
1．只适用于血清或血浆标本。
2．本法为初筛，阳性结果须用其他方法进一步确认。
3．本法为定性实验，不能确定其在标本中的具体含量。
4．测试结果应在15min时读取，20min后判定无效。
5．操作失误或者标本中存在干扰物质，有可能导致错误的结果。
表5-2 乙肝两对半血清学指标检测结果常见模式分析
表5-3 乙肝两对半血清学指标检测结果少见模式分析
【方法学优点】
1．操作简单、方便、快捷，15min即可出结果。
2．在检测临床HAV、HCV、RF和VDRL阳性血清标本中，结果没有交叉反应。