一、梅毒测定
梅毒是一种全身性慢性传染病。通过商业往来，梅毒从国外进入了我国，1505年在广东省首先发现和记述了梅毒病例，此后，梅毒便从沿海到内地在我国广泛传播开来，发病率居高不下，居性病之首。新中国成立后，由于党和政府取缔了妓院，禁止卖淫活动，对性病进行广泛的普查普治，已于1959年基本上消灭了梅毒。20世纪70年代以来，随着社会的发展，性病又在我国死而复生，特别是梅毒发病人数大大增加，发病人数急剧上升。
（一）病因及传播
梅毒的病原体是一种螺旋体，梅毒螺旋体是一种小而纤细的呈螺旋状的微生物，长度为5～20nm，直径＜0．2nm。它有6～12个螺旋，肉眼看不到，在光镜暗视野下，人们仅能看到梅毒螺旋体的折光性，其活动较强。在其前端有4～6根鞭毛样细纤维束，其末端呈卷曲状。在未受外界因素的影响时，螺旋是规则的。因其透明不易着色，又称之为苍白螺旋体。它可存在于梅毒患者皮肤黏膜硬下疳、皮疹、体液中。当与健康人性接触时，螺旋体就随分泌物进入健康人体有破损的皮肤黏膜（即使是很细微的肉眼看不见的损伤），而使接触者受到感染。极少数可通过输血或接触污染了梅毒螺旋体的物品被传染。母亲患梅毒可传染给胎儿。医学上称之为梅毒螺旋体（Tre-ponema palidum），1905年是由法国科学家Schaudinn与Hoffmanu发现并报道的。
梅毒的传染性随着病期的延长而减小。一期、二期的梅毒患者都具有传染性，她们的皮肤黏膜损害处有大量的梅毒螺旋体存在，潜伏早期的梅毒患者也有传染性。病程超过2年以上时，梅毒的传染性会逐渐减弱，即使与未经过治疗的病程在2年以上的梅毒妇女有性接触，一般也不会被传染。病程越长，传染性越小，病程超过8年以上者，其传染性已非常小。
梅毒螺旋体是厌氧菌，在体内可长期生存繁殖，只要条件适宜，便以横断裂方式一分为二地进行繁殖。在体外不易生存，煮沸、干燥、肥皂水和一般的消毒剂（如升汞、苯酚、乙醇等）很容易将它杀死。
（二）临床表现
1．后天性梅毒 分早期梅毒和晚期梅毒。早期梅毒的病程在感染后两年以内，包括一期梅毒和二期梅毒，晚期梅毒的病程在感染后两年以上，即三期梅毒。
一期梅毒：即硬下疳，潜伏期2～4周，外生殖器部位发生暗红色硬肿块、浅溃疡，有软骨样硬度，周围淋巴结增大。
二期梅毒：在一期梅毒1～2个月之后，全身皮肤、黏膜发生对称泛发皮疹、斑疹、丘疹、脓疱疹等。黏膜可发生黏膜斑、扁平湿疣，传染性强。
三期梅毒：发生在感染后2～3年乃至10年，皮肤为树胶样肿，还可涉及骨、关节、心、血管，表现为主动脉炎、主动脉瓣闭锁不全和主动脉瘤等，侵及神经为脊髓结核，全身麻痹（麻痹性痴呆）。
2．先天性梅毒 先天性梅毒是由母体通过胎盘传给胎儿，常引起早产和死胎。
（1）早期先天性梅毒：症状发生在两岁以内者，主要表现有鼻炎，此外还可表现有咽炎、消瘦、失眠、淋巴结和肝脾大、骨软骨炎、假性瘫痪等。皮肤黏膜损害表现有丘疹鳞屑性或大疱性皮疹、扁平湿疣、黏膜斑等。
（2）晚期先天性梅毒：症状发生在两岁以上者，表现有基质性角膜炎、马鞍鼻、马刀胫、梅毒齿（hutchinson）、神经性聋等。其他一般与三期后天梅毒相似。
（3）潜伏梅毒（隐性梅毒）：未得到治疗的二期梅毒，其症状体征往往能自然消退而进入无症状期，称为潜伏期。如得不到治疗，患者可复发，一般多在2年内复发。2年以内的患者称为早期潜伏梅毒，2年以上者称为晚期潜伏梅毒。晚期潜伏梅毒极少复发，但孕妇仍可胎传。潜伏梅毒除血清反应阳性外，无任何症状。潜伏梅毒虽无症状，但螺旋体继续潜伏在体内重要器官，数年乃至数十年后会出现三期梅毒，如眼、鼻损害、心血管梅毒、神经梅毒、精神失常等，甚至死亡。女性梅毒患者妊娠后，梅毒螺旋体可以通过母血到达胎盘，破坏胎盘后传给胎儿。妊娠6～7周时胎儿即被传染，发生流产、死胎、早产等。染有梅毒的婴儿，可有皮肤、骨骼、牙齿、肝脾等脏器梅毒损伤，在出生2年后陆续表现出来，严重的可有眼盲、脑损害等。
（三）实验室检查
1．一期梅毒
（1）暗视野显微镜检查：皮损组织液或淋巴结穿刺液可查见梅毒螺旋体。
（2）梅毒血清学试验：如感染不足2～3周，非螺旋体抗原试验可为阴性，4周后复查可为阳性。
以上两项试验有一项阳性即可。
2．二期梅毒
（1）暗视野显微镜检查：二期皮疹尤其是扁平湿疣、湿丘疹及黏膜斑的渗出液内可查见梅毒螺旋体。
（2）梅毒血清学试验：强阳性。
3．三期梅毒（晚期梅毒）
梅毒血清学试验：非螺旋体抗原试验大多为阳性，亦可阴性。螺旋体抗原试验为阳性。
4．先天性梅毒
（1）早期皮肤及黏膜损害中可查到梅毒螺旋体。
（2）梅毒血清学试验：阳性。
5．潜伏梅毒（隐性梅毒） 非螺旋体抗原试验2次以上阳性（需排除生物学假阳性）或螺旋体抗原试验阳性。
（四）检测方法
1．暗视野显微镜检 暗视野显微镜检查是一种检查梅毒螺旋体的方法。暗视野，顾名思义即是显微镜下没有明亮的光线，它便于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。
【标本采集】 用无菌纱布清洁病灶，然后刮取溃疡处，至轻微出血，挤压使组织液渗出，吸取渗出液滴在洁净的玻片上，盖好盖片，立即送检。
【操作方法】 暗视野显微镜检查。
【结果判读】 发现菌体细长，运动活泼，折光性强，有8～14个密螺旋组成的螺旋体时，结合临床表现可报告发现梅毒螺旋体。
【临床意义】 早期皮肤黏膜损害（一期、二期梅毒）可查到苍白螺旋体。一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率最高。早期先天性梅毒，可以通过皮肤或黏膜损害处刮片发现梅毒苍白螺旋体。现通过羊膜穿刺获得孕妇的羊水，作暗视野显微镜观察，对先天性梅毒有诊断价值。
2．梅毒血清学检测 梅毒血清学检查对于诊断二期、三期梅毒，以及判定梅毒的发展和痊愈，判断药物的疗效都有十分重要的意义。梅毒血清学检查包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验，以下将分别阐述二者的原理、监测方法及优缺点。
非梅毒螺旋体血清试验：这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。仅选用临床常用的快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）来介绍。此试验可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。
【检测原理】 以纯化的心磷脂、卵磷脂、胆固醇和乙醇溶液配成VDRL抗原，然后将其重新混悬于特制溶液中，与血清或血浆中的梅毒抗体反应，产生肉眼可见的凝集反应。
【标本采集】 血清或血浆。
【操作方法】
（1）定性实验
①加待检血清或血浆50μl于纸卡漆圈内，涂布均匀。
②阳性对照操作同上。(https://www.daowen.com)
③摇匀RPR试剂，用专用吸管滴加RPR试剂1滴于圈内血清中。
④将纸卡放置RPR旋转仪上，按100r／min，水平转动8min，肉眼观察结果。
（2）定量试验：将待检血清用生理盐水做2倍稀释，操作方法同定性实验。
【结果判读】
1．阳性 为圆圈的中心或边缘有较大的凝块，或圆圈内有均匀的凝块。
2．弱阳性 为圆圈内有肉眼可见的明显小凝块。
3．阴性 为圆圈内有均匀碳粒呈现灰黑色，并集中于中央。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】
（1）临床症状提示为Ⅰ期或Ⅱ期梅毒而梅毒螺旋体筛选试验又为阴性，则需进一步实验检查，直至疑为早期感染的临床表现消失为止。
（2）RPR实验为阳性需进一步用梅毒螺旋体血清试验进一步进行确认。
【方法学优点】 RPR实验表现为滴度随疗程逐渐下降，故可作为疗效观察的指标。
【局限性】
（1）在多种疾病中，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉吸毒者以及怀孕妇女可出现假阳性反应。
（2）RPR实验有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的前带现象。
（3）梅毒感染后RPR反应中反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗体，晚期反应素又可能转阴，因此这类试验不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经性梅毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量的漏检。
梅毒螺旋体抗原血清试验：此试验用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和（或）IgG抗体，其敏感性和特异性均较高，以梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）加以介绍。
【检测原理】 用超生裂解的梅毒螺旋体为抗原，与人工合成的惰性明胶颗粒相结合，进而与人血清或血浆中的梅毒螺旋体结合，产生肉眼可观察的凝集反应。
【标本采集】 血清或血浆。
【操作方法】
（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴（100μl），从第2孔至第4孔各1滴（25μl）。
（2）用加样枪取样品25μl至第1孔中，然后用加样枪以倍比稀释法从第1孔稀释至第4孔。
（3）吸取25μl未致敏粒子加入在第3孔中，在第4孔中滴入25μl致敏粒子。
（4）用平板混合器混合30min，加盖后于室温下水平静止。2h后，观察结果。
【结果判读】
（1）粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形，判定“-”。
（2）粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形，判定“±”。
（3）粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围，判定“＋”。
（4）产生均一的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展，判定“
”。
【判定基准】
（1）阳性，未致敏粒子孔判读为“-”，致敏粒子孔判读为“＋”时，最终判定为阳性。
（2）阴性，无论未致敏粒子孔为何种判读，只要致敏粒子孔判读为“-”时，最终判定为阴性。
（3）弱阳性，未致敏粒子孔判读为“-”，致敏粒子孔判读为“±”时，最终判定为弱阳性。
【参考范围】 阴性。
【临床意义】 主要是用于判定试验，但是它不能判定治疗效果，一旦患有梅毒，这一试验将终身阳性。
【方法学优点】
（1）试剂稳定，批间差小。
（2）结果判读清晰准确。
（3）敏感性和特异性比较高。
梅毒血清学试验程序，见图5-9。
图5-9 梅毒血清学检测程序