一、临床诊断要点
1.流行病学特点
多种动物均可感染本病，幼龄动物有抵抗力，性成熟动物多发病；病畜及带菌畜是主要传染源，在流产胎儿、胎衣、羊水、流产母畜阴道分泌物、乳汁及公畜的精液内都含有大量病原体，凡被污染的饲草、饲料、饮水、垫草、用具等都可成为间接接触传染的媒介。易感畜主要经口感染，也可通过交配、人工授精、皮肤或黏膜的接触而感染，尤其是可以通过健康的皮肤黏膜感染。发病无季节性，但春季产羔季节较为多见。本病常呈地方性流行。多数牛羊流产一次便可获得终身免疫。人的感染多因放牧牛羊、接产、屠宰、皮毛加工等过程中个人防护不严所致。
2.临床症状特点
妊娠母畜流产、胎儿胎衣在子宫内滞留、不育；有的表现出关节炎症状，尤其是膝关节和腕关节多发。母牛羊除流产外，其他症状常不明显。流产多发生在妊娠后的3～4个月。有的山羊流产2～3次，有报道，山羊群中流产可达50%～90%，绵羊流产可达40%。流产前，表现减食、口渴、精神沉郁，阴门流出黄色黏液。公山羊常可见睾丸炎，公绵羊则常见附睾炎等。
3.病理剖检特点
胎衣呈黄色胶冻样浸润，流产胎儿的第4胃中有浅黄色或白色的黏液絮状物，胃肠或膀胱的浆膜下可见到出血点和出血斑。公羊精囊内有出血点和坏死灶、睾丸和附睾可能有炎性坏死灶和化脓灶。
4.实验室诊断
检查项目主要包括细菌学检查、血清学试验及变态反应等。
（1）细菌学检查 包括直接镜检和分离培养，后者因其需要较长时间培养，故不常应用。直接镜检的方法步骤为：
1）采集病料。最好采取流产胎儿的胃内容物、肺、肝、脾和流产胎盘及羊水。
2）病料涂、抹片，做革兰氏染色和柯兹罗夫斯基（鉴别染色法）染色，镜检，若发现革兰阴性、鉴别染色呈红色的球杆菌或短小杆菌，即可做出初步诊断。
（2）血清学试验 实验方法有多种，因牛羊感染布鲁氏菌7～15天，血液中即出现凝集素，随后凝集素滴度逐渐增高，并可持续很长时间。且凝集反应的特异性和敏感性均较高，操作又较简便，目前广泛应用。
试验中，常先用平板凝集试验或乳汁环状试验进行初筛，发现阳性家畜，再以试管凝集试验和补体结合试验进行最后确诊。
1）平板凝集试验。参见第一章第四节。
2）乳汁环状试验（全乳环状反应）。
①试剂与材料：
a.抗原：目前我国生产2种全乳环状反应抗原。一种是苏木素染色抗原，呈蓝色；另一种是四氮唑染色抗原，呈红色。试验时不论哪种抗原，均按乳脂的颜色和乳柱的颜色进行判定。
b.被检乳：被检乳须为新鲜的全脂乳。凡腐败、变酸和冻结的不能用（采集的乳夏季应于当天内检查，若保存于2℃，7天内仍可使用）；患乳腺炎及其他乳房疾病的母牛及初乳不适合用本法；脱脂乳及煮沸过的乳也不能用于环状反应。
c.器具：移液器、灭菌小试管、恒温水浴锅等。
②操作方法步骤：
a.采取4个乳头的新鲜全脂乳，混合均匀后，吸取1毫升盛于灭菌小试验管中。
b.按抗原标签的规定向小试管中加入全乳环状反应抗原1滴（约0.05毫升），充分振荡混合。
c.置于37～38℃水浴中60分钟；小心取出试管（勿使振荡），立即进行判定。
③判定标准：
a.强阳性反应（+++）：乳柱上层的乳脂形成明显红色或蓝色的环带。乳柱呈白色，分界清楚。
b.阳性反应（++）：乳脂层的环带虽呈红色或蓝色，但不如“+++”显著，乳柱微带红色或蓝色。
c.弱阳性反应（+）：乳脂层环带颜色较浅，但比乳柱颜色略深。
d.疑似反应（±）：乳脂层环带不甚明显，并于乳柱的分界模糊，乳柱带有红色或蓝色。
e.阴性反应（-）：乳柱上层无任何变化，乳柱呈均匀浑浊的红色或蓝色。
提示
脂肪较少或无脂肪的牛乳呈阳性反应时，菌体呈凝集现象下沉于管底，判定时以乳柱的反应为标准。
3）试管凝集试验。
①试剂与材料：(https://www.daowen.com)
a.抗原：由指定单位提供。本抗原是将布氏杆菌死菌体悬浮于0.5%苯酚生理盐水中制成。静置时，上层为清亮无色或略呈灰白色的液体，瓶底有菌体沉淀，使用时须充分摇匀。我国的抗原是用国际标准标定制造的，抗原的1∶20稀释液对国际标准阳性血清凝集价恰为1∶1000“++”。使用时用0.5%苯酚生理盐水按1∶20稀释。有真菌污染或出现凝集块的抗原不能应用。
b.被检血清：被检血清必须新鲜，无明显蛋白凝固，无溶血现象和无腐败气味。加入防腐剂的血清自采血之日算起，最迟应于15天内检验。
c.阳性血清：由指定单位提供，通常取自人工免疫的家畜，但也可从送检血清中选取，凝集价最好不低于1∶800。
d.阴性血清：由指定单位提供。
e.试验用稀释液：0.5%苯酚10%盐水溶液（用化学纯苯酚5毫克和化学纯食盐100毫克加至1000毫升蒸馏水中制成，为检验羊血清专用稀释液），经高压灭菌后备用。
②操作方法步骤：
a.稀释被检血清：一般情况下，牛等大家畜用1∶50、1∶100、1∶200、1∶400共4个稀释度；羊等用1∶25、1∶50、1∶100、1∶200共4个稀释度。大规模检疫时，牛羊均可分别用前2个稀释度。
以羊为例：每份血清用5支口径8～10毫米的小试管，第1管加入0.5%苯酚10%盐水溶液2.3毫升，第2管不加，第3、4、5管各加0.5毫升。用吸管吸取被检血清0.2毫升，加入第1管中，并混合均匀。混合方法：将该试管中的混合液吸入吸管内，再沿管壁吹入原试管中，如此吸入、吹出3～4次。混匀后，用该吸管吸取混合液分别加入第2管和第3管，每管0.5毫升。用该吸管将第3管的混合液混匀（方法同前）吸取0.5毫升加入第4管混合后，又从第4管吸出0.5毫升加入第5管，第5管混匀后弃去0.5毫升。如此稀释之后从第2管起血清稀释度分别为1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100。
b.加入抗原：先以0.5%苯酚10%盐水溶液将抗原原液稀释20倍，向上述各血清稀释管内加入0.5毫升（第1管不加，留作血清蛋白凝集对照），振摇均匀；加入抗原后，第2～5管各管混合液的容积均为1毫升，血清稀释度从第2管起依次变为1∶25、1∶50、1∶100和1∶200。
c.对照管的制作：每次试验须做3种对照各1份。
阴性血清对照：阴性血清的稀释和抗原的加入方法同被检血清。
阳性血清对照：阳性血清须稀释到其原有滴度，加抗原的方法同被检血清。
抗原对照（看抗原有无自凝现象）：加1∶20抗原稀释液0.5毫升于试管中，再加0.5毫升0.5%苯酚10%盐水溶液稀释。
d.比浊管的制作：每次试验须配制比浊管作为判定清亮程度（凝集反应程度）的依据。配制方法如下：取本次试验用的抗原稀释液（即抗原原液的20倍稀释液）5～10毫升，加入等量的0.5%苯酚10%盐水溶液，进行倍比稀释，然后按表4-2配制比浊管。
表4-2 牛羊布氏菌试管凝集试验比浊管配制表
e.全部充分振荡后，置于37～38℃恒温箱中，经22～24小时反应，取出检查并记录结果。
f.判定、记录结果：根据各管中上层液体的清亮度，用比浊管作对照，记录凝集反应的强度（凝集价），特别是50%清亮度（即“++”的凝集）判定结果。
++++：完全凝集和沉淀，上层液体100%清亮（即100%菌体下沉）。
+++：几乎完全凝集和沉淀，上层液体75%清亮。
++：显著凝集和沉淀，液体50%清亮。
+：沉淀明显，液体25%清亮。
-：无沉淀，不清亮。
确定每份血清的效价时，应以出现2个“++”以上的凝集现象（即50%的清亮）的最高血清稀释度为血清的凝集价。
③试验结果的判定。牛于1∶100稀释度、羊于1∶50稀释度出现“++”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应；牛于1∶50稀释度、羊于1∶25稀释度出现“++”以上凝集现象，被检血清判定为可疑反应。
可疑反应的家畜，经3～4周，须重新采血检验，如果重检时仍为可疑，则该畜判定为阳性。
提示
牛的布氏杆菌病试管凝集试验与羊的不同点：
a.血清的稀释液和抗原稀释液均使用0.5%苯酚生理盐水。
b.血清稀释时，第1管加稀释液2.4毫升、被检血清0.1毫升。
c.各管加抗原后，血清稀释度分别为1∶50、1∶100、1∶200、1∶400。
