三、生化指标检测

正常情况下，骨形成与骨吸收之间保持动态平衡。当这一平衡被破坏，骨吸收大于骨形成时，骨量流失而发生骨质疏松。因此可以通过检测骨转换过程的生化指标来判断骨质疏松模型是否复制成功。

骨代谢生化指标可分为骨形成标志物和骨吸收标志物两类。

骨形成标志物是成骨细胞在其不同发育阶段的直接或间接表达产物，反映成骨细胞功能和骨形成状况。主要包括：骨钙素(BGP)、骨连接蛋白、骨源性碱性磷酸酶 (BALP)、I型胶原氨基前肽 (PINP)、Ⅰ型胶原羧基前肽 (PICP)等。BALP是由成骨细胞 (osteoblast，OB)分泌的胞外酶，OB活动增强，则BALP分泌增加。近年来建立的免疫分析法由于其特异性好、可靠性强、灵敏度高、操作简便，被广泛应用于临床。与BGP和 PICP相比，PINP更为敏感，特异性更好，而且不受激素影响，对患者进行激素治疗不会影响血浆中PINP水平［42］。

骨吸收标志物主要包括：抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)、吡啶啉 (PYD)、脱氧吡啶啉 (DPD)、Ⅰ型胶原羧基交联肽(CTX)、Ⅰ型胶原氨基交联肽 (NTX)等。PYD主要存在于骨和软骨中，DPD只存在于骨组织中，且DPD降解产物被释放入血，交联物在血中不被降解，不被肝代谢，不受饮食影响，骨组织特异性高［42］。从尿液检测的数据比从血清中检测更为准确，连续测定尿中PYD和DPD可得到长久的骨代谢变化，并可有效地监测抗骨吸收的治疗效果［43］。NTX和CTX被认为是更特异的反应骨吸收状态的指标。血清CTX在未接受干预的个体内含量稳定，但在骨质疏松治疗前后变化较大，因此可以用来评判治疗效果［5］。(https://www.daowen.com)

检测血清、血浆或者尿液中的生化标志物时可以采用液相色谱法 (LC)、放射免疫鉴定法 (RIA)和酶联免疫吸附法 (ELISA)等多种方法。检测过程获取样本不需要处死模型动物，可长期观察取样，并可以观察动物模型在不同处理条件下的骨代谢变化。通过检测骨转换生化指标还可以预测骨折发生的风险性［44］。

利用生化指标来评价骨质疏松模型也有不足之处。生化指标反映的是模型整体的骨代谢情况，不能区分骨代谢变化发生在皮质骨还是松质骨。年龄和骨体积改变可能影响所有生化指标水平，因此在解释处于生长期或发生重度骨丢失动物实验所得的数据时更须慎重［31］。