快速诊断及类症鉴别
1.临床诊断
(1)发病特点 仅猪发病,主要侵害1~3周龄的猪。病毒主要存在于上呼吸道和脑组织,由鼻分泌物排出,经呼吸道和消化道感染,不发生子宫内感染,成年猪呈隐性感染,但可以排毒。严重时仔猪发病率和死亡率可达100%。本病流行有一定自限性,发生过此病的母猪,以后所产仔猪不再发病。
(2)临床症状
1)呕吐消瘦型:病初体温升高,反复呕吐,仔猪聚堆,弓背、磨牙、精神委顿。个别出现咽喉肌肉麻痹,不能吞咽,口流泡沫,便秘。随后严重脱水,结膜发绀,昏迷死亡,不死的转为僵猪。
2)脑脊髓炎型:厌食、昏睡,呕吐、便秘,四肢发紫。打喷嚏、咳嗽和磨牙等症状。1~3天后出现中枢神经系统障碍,知觉过敏,对声响和触摸表现过敏,发出尖叫声,共济失调,后肢麻痹呈犬坐姿势,倒地后四肢呈游泳状划动,呼吸困难,眼球震颤,失明,死前不久昏迷,病程10天,病死率几乎100%。
2.病理学诊断
肉眼病变不明显,诊断意义不大。某些脑脊髓炎病例呈现轻度的卡他性鼻炎。消瘦型,肺呈慢性间质性支气管炎,肺泡上皮肥厚,肺气肿。某些呕吐消耗病例,仅见胃肠炎变化。组织学检查可看到非化脓性脑脊髓炎的病变。
3.免疫学诊断
(1)血清中和试验 取0.1mLHEV(500个TCID50)与0.9mL不同稀释度的待检血清混合,37℃孵育1h。取不同的混合液0.2mL分别加入铺满胎猪单层肾细胞的培养板中,并设阴、阳性血清对照,于37℃培养48h后,观察细胞病变。阳性血清对照孔的细胞无病变出现,阴性血清对照孔的细胞胞浆内形成空泡,核浓缩致密化,继而变得不透明,最后卷缩,形成不规则的细胞块,并从细胞层脱落,漂浮于培养液中。当被检血清的中和效价大于1∶8时判为阳性,小于该值则为阴性。(https://www.daowen.com)
(2)琼脂扩散试验 制琼脂糖平板后打孔,中央孔与周围孔距为3mm。向中央孔滴加HEV抗原。周围孔分别滴加待检血清、阳性和阴性对照血清,于25℃扩散24~48h观察结果。当抗原与待检血清出现特异性沉淀线,且其与阳性对照血清产生的沉淀线一致时判为阳性,不出现沉淀线时判为阴性。
4.病原学诊断
(1)血凝抑制试验 猪感染后7天产生抗体,2~3周达到高峰。因此,从发病仔猪的母猪或同窝存活仔猪采血制备血清,进行血凝抑制试验可获得较好的诊断结果。在对照各孔成立的前提下进行结果判定。具体操作和结果判定参照猪乙型脑炎。
(2)动物试验 取病猪脑组织作成无菌乳剂,离心后取上清液,腹腔或皮下接种幼龄小鼠,可引起小鼠麻痹致死。
(3)细胞接种试验 病料上清液经0.22μm滤膜过滤除菌,接种于猪肾原代细胞培养物,培养12~16h,开始观察细胞病变,迟至48h可见到多核巨细胞(融合细胞)形成。多核巨细胞的形成是本病特征性的病变。
(4)红细胞吸附试验 猪肾原代细胞接毒后48h,将细胞培养液倒掉,加入等量的0.1%的鸡红细胞悬液,于37℃吸附30min,弃去鸡红细胞悬液,并用PBS液洗涤3次,显微镜下可见有花瓣样红细胞吸附现象。
5.类症鉴别
(1)与猪传染性胃肠炎的鉴别 两者均表现食欲不振、体温升高、呕吐、消瘦等症状。不同点是:猪传染性胃肠炎除表现呕吐和消瘦外,还可见到水样腹泻,不表现神经症状。两种病毒均能在猪肾细胞内生长,猪血凝性脑脊髓炎病毒可形成多核合胞体、产生血细胞凝集素,而猪传染性胃肠炎病毒不能。前者不常引起腹泻,肠绒毛无特征性病变;后者严重腹泻,肠绒毛可见特征性病变,无神经症状。
(2)与伪狂犬病的鉴别 两者均表现体温升高,运动失调,站立不稳,痉挛等症状,不同点是:伪狂犬表现的神经症状多发于2~3日龄的仔猪,在同群妊娠母猪中还可见到流产,产死胎、木乃伊胎。
(3)与猪传染性脑脊髓炎的鉴别 两者均表现体温升高,运动失调,站立不稳,痉挛等症状,不同点是:猪传染性脑脊髓炎多发于4~5周龄仔猪,发病症状为四肢僵硬,前肢前移,后肢后移,不能站立,发病呈波浪式,惊厥常持续24~36h。成猪多呈隐性感染。