方法适用性建立
7.1 菌悬液制备、菌悬液数量测定同预试验方法。
7.2 需氧菌计数方法适用性试验。
7.2.1 试验组。取八味柴芍合剂1∶10的供试液2 mL分别加到5个灭菌的三角瓶中,分别加入金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升八味柴芍合剂1∶10的供试液,含菌数小于100 cfu,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液200 mL,进行薄膜过滤,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。
7.2.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。
7.2.3 供试品对照组。取八味柴芍合剂1∶10的供试液2 mL,加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液200 mL,薄膜过滤后取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,进行培养、计数。
7.2.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基1 mL替代样品,薄膜过滤后取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,进行培养、计数。
7.3 霉菌和酵母菌总数方法适用性试验。
7.3.1 试验组。取八味柴芍合剂1∶10的供试液分别加到2个灭菌的三角瓶中,每瓶10 mL,分别加入白色念珠菌、黑曲霉的0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升八味柴芍合剂1∶10的供试液,含菌数小于100 cfu,取含菌的样品溶液1 mL(50~100 cfu),置直径90 mm的无菌平皿中,每个菌液注2个平皿,注入20 mL温度不超过45℃溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,培养、计数,测定菌数。
7.3.2 菌液对照组。稀释后白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液加沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,培养、计数,测定阳性对照菌数。
7.3.3 供试品对照组。用供试液替代试验组液体注皿,计数。
7.3.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基替代样品注皿,注入20 mL温度不超过45℃溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,培养、计数,测定阴性对照菌数。
计数方法适用性试验结果见表5。
表5 计数方法适用性试验
注:-表示平板无菌落生长。
7.4 大肠埃希菌方法适用性,按预试验方法可以检出目标菌,方法可行。