方法适用性建立

九、方法适用性建立

9.1 菌悬液制备、菌悬液数量测定同预试验方法。

9.2 需氧菌计数方法适用性试验。

9.2.1 试验组。分别取克霉唑10 cm2∶10 mL的供试液2 mL,加到5个灭菌的三角瓶中,加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,分别加入金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉的0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升克霉唑10 cm2∶10 mL的供试液,含菌数小于100 cfu,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。

9.2.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。

9.2.3 供试品对照组。取克霉唑10 cm2∶10 mL的供试液2 mL,加到灭菌的三角瓶中,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。

9.2.4 阴性对照组。同法进行试验。

9.3 霉菌和酵母菌总数方法适用性试验。

9.3.1 试验组。分别取克霉唑10 cm2∶10 mL的供试液2 mL,加到2个灭菌的三角瓶中,加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,并分别加入白色念珠菌、黑曲霉的0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升克霉唑10 cm2∶10 mL的供试液,含菌数小于100 cfu,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。

9.3.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。

9.3.3 供试品对照组。取克霉唑10 cm2∶10 mL的供试液2 mL,加到灭菌的三角瓶中,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。

9.3.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的稀释剂2 mL,加到灭菌的三角瓶中,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。

计数方法适用性试验结果见表10。

表10 计数方法适用性试验

注:-表示平板无菌落生长。

9.4 白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌方法适用性,按预试验方法可以检出目标菌,方法可行。