方法适用性建立
8.1 菌悬液制备、菌悬液数量测定同预试验方法。
8.2 需氧菌计数方法适用性试验。
8.2.1 试验组。分别取神皮酊1∶10的供试液2 mL,加到5个灭菌的三角瓶中,分别加入金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉的0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升神皮酊1∶10的供试液,含菌数小于100 cfu,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。
8.2.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。
8.2.3 供试品对照组。取神皮酊1∶10的供试液2 mL,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。
8.2.4 阴性对照组。同法进行试验。
8.3 霉菌和酵母菌总数方法适用性试验。
8.3.1 试验组。分别取神皮酊1∶10的供试液2 mL,加到2个灭菌的三角瓶中,分别加入白色念珠菌、黑曲霉的0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),制成每毫升神皮酊1∶10的供试液,含菌数小于100 cfu,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。
8.3.2 菌液对照组。稀释后白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液加沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,培养、计数,测定阳性对照菌数。
8.3.3 供试品对照组。取神皮酊1∶10的供试液2 mL,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜300 mL,取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。
8.3.4 阴性对照组。同法进行试验。
计数方法适用性试验结果见表8。
表8 计数方法适用性试验
注:-表示平板无菌落生长。
8.4 铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌方法适用性,采用薄膜过滤方法进行试验,可以检出试验菌,方法可行。