【实验方法】

1.处死小鼠，从腹腔内抽取腹水，用低速离心机离心数秒，将上清液倒去，取一滴腹水液滴在载玻片1一端，取另一张载玻片2，轻轻接触腹水液，2张载玻片呈45°角，轻推载玻片2使腹水平摊于切片上，自然风干后，浸入95%乙醇固定5min（涂片的制作方法如图2.8所示）；解剖实验动物，初步处理实验所需的组织脏器；将构建的实验动物按照实验要求及目的分组编号后处死，每只实验鼠一个固定编号。解剖实验动物时，充分暴露实验动物的颅腔、胸腔与腹腔。摘取并记录每只实验鼠的主要脏器（如脑、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、双侧肾脏）及组织（如接种的肿瘤组织）的基本情况（质量、大小、数量，接种的肿瘤组织要注明在实验鼠体内的位置等）。用新鲜的生理盐水和新鲜配制的10%中性缓冲福尔马林溶液（10%中性缓冲福尔马林配制方法：甲醛100mL，磷酸二氢钠4g，磷酸氢二钠6.5g，蒸馏水900mL）冲洗实验所需的组织脏器，直至冲洗液透明不再混有血液。

2.固定组织脏器及取材：将初步处理好的组织脏器按最大切面剖开放于广口瓶中，用新鲜配制的中性福尔马林溶液充分固定，一鼠一号，一鼠一瓶，并将该鼠的固定标号贴在广口瓶上。组织固定时间一般为24h。

将固定好的组织脏器从广口瓶中取出，充分冲洗，按最大剖面原则切成厚度约为2～4mm的薄片，大小不超过1.5cm×2cm，注意保证切面平整，将取好的组织块放于写好相应编号的脱水盒中。

3.组织脱水、透明、浸蜡：将放于脱水盒中的取好的实验组织、脏器，进行脱水、透明、包埋，具体方法步骤和注意事项参照本书第一篇第二章第二节。

4.组织包埋、切片

（1）将处理好的组织放入熔好的石蜡中包埋；

（2）包埋好的蜡块在切片前要先粗修；

（3）固定好蜡块后，右手轻柔且匀速旋转转轮，左手持毛笔，用毛笔轻轻托起拉展切出的蜡片；

（4）将切好的蜡片正面向上放入低浓度乙醇内初展片，再用载玻片捞起放入温水中展平捞起于载玻片中下1/3处，将切好的切片干燥并烤片。

具体方法步骤和注意事项参照本书第一篇第二章第二节。

5.切片染色

（1）二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ脱蜡5～10min；(https://www.daowen.com)

（2）无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各2min；

（3）95%乙醇→90%乙醇→80%乙醇→自来水洗各1～2min；

（4）Harris苏木素染色1～5min；

（5）自来水洗1min，盐酸乙醇液分化数秒，自来水洗1min，淡氨水返蓝30s，自来水洗1min；

（6）伊红20s～5min；

（7）85%乙醇→90%乙醇→95%乙醇→无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各1～2min；

（8）二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ透明各5min；

（9）中性树胶封固。

腹水涂片染色从水洗开始，以下与组织切片步骤一致。

具体方法步骤和注意事项参照本书第一篇第二章第二节。

6.按照编号分组整理组织切片，在显微镜下检查切片质量，必要时补做切片。保存好蜡块。