1.4.1　提取RNA

（1）用于RNA提取的器皿均经去RNase处理；配置DEPC水：称取1g的DEPC用1000ml的灭菌水溶解，37℃磁力搅拌1h或者放置过夜，高压灭菌。

（2）将组织放入液氮中研磨成粉末，每个样品加入1ml Trizol，室温放置5min。

（3）按照200μl氯仿/ml Trizol加入氯仿，混匀后室温放置15min，4℃15000rpm×15min。(https://www.daowen.com)

（4）吸取上层清亮液体，至另一离心管中，按0.5ml异丙醇/ml Trizol加入异丙醇并混匀，-20℃下放置20min，在4℃，15000rpm离心15min，弃上清液，RNA沉于管底。

（5）按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇（应用DEPC处理过的双蒸水和100%乙醇配置，不能应用直接购买的75%乙醇），温和振荡离心管，悬浮沉淀。4℃7000rpm离心5min，尽量弃上清液，可用吸引器吸干沉淀周围水分，为防止吸走RNA，可以用10μl枪头吸，也可用吹风机吹干，不可直接对着RNA吹，应吹管壁外侧，利用稍微升温，蒸发干剩余乙醇。

（6）加入20μlDEP处理过的双蒸水溶解RNA。吸取1μl，稀释100倍后测RNA浓度。将RNA用于逆转录，剩余RNA储存于-80℃冰箱内。