RND3在人脑胶质母细胞瘤中的作用及机制研究_基础医学

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武汉大学优秀博士学位论文文库编委会

主　任　李晓红副主任　韩　进　舒红兵　李　斐委　员（按姓氏笔画为序）(https://www.daowen.com) 　　　　马费成　邓大松　边　专　刘正猷...

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武汉大学优秀博士学位论文文库

已出版基于双耳线索的移动音频编码研究/陈水仙　著多帧影像超分辨率复原重建关键技术研究/谢伟　著 Copula函数理论在多变量水文分析计算中的应用研究/陈璐　...

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总　序

创新是一个民族进步的灵魂，也是中国未来发展的核心驱动力。研究生教育作为教育的最高层次，在培养创新人才中具有决定意义，是国家核心竞争力的重要支撑，是提升国家软实力...

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摘　要

胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）是成人中枢神经系统最常见最致命的原发性恶性肿瘤，常用治疗方法为手术治疗、放疗和化疗。但即使...

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Abstract

Glioblastoma multiforme(GBM)was the most common and lethal primary brain tumor i...

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引　言

脑胶质瘤起源于神经胶质细胞，是中枢神经系统最常见的致命恶性肿瘤，占颅内肿瘤的50%～60%，严重威胁患者身体健康。目前胶质瘤标准治疗包括手术治疗、放疗及化疗。但...

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第1章　材料与方法

(https://www.daowen.com)...

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1.1　免疫组织化学染色

(https://www.daowen.com)...

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1.1.1　制作蜡块

（1）固定：固定前用PBS清洗组织，去除血液，10ml 4%的多聚甲醛〔使用PBS将32%多聚甲醛（Electron Microscopy Science 15...

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1.1.2　切片

将组织周围保留约0.3cm厚度的蜡，其余切除。切片厚度为6μm，50℃热水中展片，编号，37℃烤箱过夜，4℃冰箱保存备用。(https://www.daowen...

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1.1.3　免疫组织化学染色

（1）石蜡切片脱蜡至水。 ①在60℃烤片2h，立即放入histone clear 1中（室温）5min；②histone clear 2中（室温）5min；③h...

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1.2　免疫荧光双染

(https://www.daowen.com)...

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1.2.1　石蜡切片脱蜡至水

①在60℃烤片2h，立即放入histone clear 1中（室温）5min； ②histone clear 2中（室温）5min； ③histone clea...

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1.2.2　抗原修复

使用以0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）进行抗原修复，100℃，抗原修复20min，自然冷却20min，放入PBS内5min。(https://ww...

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1.2.3　消除内源性过氧化物酶活性

3%H2O2室温孵育10min，PBS摇床上冲洗（5min×3次）。(https://www.daowen.com)...

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1.2.4　孵育一抗

5%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育20min。吸去血清，孵育相关一抗，RND3（兔源性，1∶200，实验室制作），GFPA（鸡源性，1∶200，ab...

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1.2.5　滴加荧光二抗

goat anti-chicken IgG antibody coupled with Alexa Fluor 488（Invitrogen，Carlsbad，...

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1.2.6　封片

滴加DAPI（4′，6′diamidino-2-phenylindole）staining（Vectashield，Vector Laboratories，In...

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1.3　免疫印迹技术

...

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1.3.1　样品的制备

将组织放入液氮中研磨成粉末，取4mg的研磨物，加入1ml细胞裂解液（25mmol/L Tris·HCl pH 7.6，150mmol/L NaCl，1%NP-4...

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1.3.2　BSA测蛋白浓度

用BSA粉剂溶于RIPA中配制BCA，浓度为40μg/μl，使用时稀释成2μg/μl、1.6μg/μl、0.8μg/μl、0.4μg/μl、0.2μg/μl...

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1.3.3　蛋白变性

将蛋白与上样缓冲液（4×）按照3∶1的体积比混匀，100℃，10min。(https://www.daowen.com)...

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1.3.4　电泳

使用4%～12%预制胶（Invitrogen，NP0335BOX，USA），每孔上样蛋白60μg，4℃，120V电泳2h。(https://www.daowen...

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1.3.5　转膜

（1）将预制胶从电泳槽上取下，用自来水冲洗，将海绵、滤纸提前泡入1×转移缓冲液中，确保滤纸与海绵中不含气泡，转膜时，在转移缓冲液中先放三层海绵，赶尽气泡，加一层...

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1.3.6　封闭

将PVDF膜面朝下用含5%的BSA（TBST稀释）的封闭液室温封闭1h。(https://www.daowen.com)...

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1.3.7　孵育一抗

NICD（兔源性，1∶1000，CST，2421，USA），RND3（羊源性，1∶200，实验室制作），GAPDH（羊源性，1∶200，Santa Cruz，s...

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1.3.8　孵育二抗

鼠抗兔二抗1∶5000，Thermo Scientific Pierce，31464，USA；鼠抗羊二抗，1∶5000 Thermo Scientific Pi...

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1.3.9　显影

将膜放入ECL显影液中，并在放入显影盒之前重新拼成整张膜，盖4张胶片，曝光30min，取出，洗片，选择曝光最佳的片子，并标记上相应Marker。(https:/...

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1.4　荧光定量PCR技术

...

《RND3在人脑胶质母细胞瘤中的作用及机制研究》简介

武汉大学优秀博士学位论文文库编委会

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总　序

摘　要

Abstract

目录

引　言

第1章　材料与方法

1.1　免疫组织化学染色

1.1.1　制作蜡块

1.1.2　切片

1.1.3　免疫组织化学染色

1.2　免疫荧光双染

1.2.1　石蜡切片脱蜡至水

1.2.2　抗原修复

1.2.3　消除内源性过氧化物酶活性

1.2.4　孵育一抗

1.2.5　滴加荧光二抗

1.2.6　封片

1.3　免疫印迹技术

1.3.1　样品的制备

1.3.2　BSA测蛋白浓度

1.3.3　蛋白变性

1.3.4　电泳

1.3.5　转膜

1.3.6　封闭

1.3.7　孵育一抗

1.3.8　孵育二抗

1.3.9　显影

1.4　荧光定量PCR技术

《RND3在人脑胶质母细胞瘤中的作用及机制研究》简介

武汉大学优秀博士学位论文文库编委会

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总 序

摘 要

Abstract

目录

引 言

第1章 材料与方法

1.1 免疫组织化学染色

1.1.1 制作蜡块

1.1.2 切片

1.1.3 免疫组织化学染色

1.2 免疫荧光双染

1.2.1 石蜡切片脱蜡至水

1.2.2 抗原修复

1.2.3 消除内源性过氧化物酶活性

1.2.4 孵育一抗

1.2.5 滴加荧光二抗

1.2.6 封片

1.3 免疫印迹技术

1.3.1 样品的制备

1.3.2 BSA测蛋白浓度

1.3.3 蛋白变性

1.3.4 电泳

1.3.5 转膜

1.3.6 封闭

1.3.7 孵育一抗

1.3.8 孵育二抗

1.3.9 显影

1.4 荧光定量PCR技术

总　序

摘　要

引　言

第1章　材料与方法

1.1　免疫组织化学染色

1.1.1　制作蜡块

1.1.2　切片

1.1.3　免疫组织化学染色

1.2　免疫荧光双染

1.2.1　石蜡切片脱蜡至水

1.2.2　抗原修复

1.2.3　消除内源性过氧化物酶活性

1.2.4　孵育一抗

1.2.5　滴加荧光二抗

1.2.6　封片

1.3　免疫印迹技术

1.3.1　样品的制备

1.3.2　BSA测蛋白浓度

1.3.3　蛋白变性

1.3.4　电泳

1.3.5　转膜

1.3.6　封闭

1.3.7　孵育一抗

1.3.8　孵育二抗

1.3.9　显影

1.4　荧光定量PCR技术