1.9.1 病毒制备

1.9.1 病毒制备

对数期生长的293T细胞,接种于10cm细胞培养盘内,密度为2×106/盘,过夜,换液。14μg GFP/GFP-RND3/siCtrl/siRND3(质粒)+8.070μg psPAX2(质粒)+5.550μg pMD2G(质粒)+50μl Trans pass D2+1ml OPTI-MEM media室温孵育25min,加入细胞培养盘内,培养箱内孵育6h,换成完全培养基。(https://www.daowen.com)

28h后收取第一次上清液,转染3d后,收取第二次上清液,转染4d后,收取第三次上清液,将上清液在2000rpm×3离心,取上清液,在20000rpm离心2h,弃上清液,用200μl PBS溶解病毒。