1.12　RND3基因敲除小鼠的构建与饲养

RND3基因敲除小鼠为本实验构建，具体信息见文献Xi Lin，et al[19]；小鼠饲养于德克萨斯医疗中心生命与科学技术研究所动物中心，纯合子RND3基因敲除小鼠命名为Homo mouse，杂合子命名为Het mouse，对照为WT mouse，使用Het的雌雄小鼠杂交得到Homo小鼠，使用WT雌性小鼠和Het雄性小鼠杂交得到WT和Het小鼠。小鼠出生后21天内做genotyping，步骤为：将耳环（带编码）打到小鼠耳朵上，用酒精灯消毒手术剪，趁热剪断小鼠尾巴约0.5mm，装入EP管，加200μl浓度为0.05mol/L的NaOH溶液，60℃过夜，加4μl浓度为10mmol/L的Tris-HCL（pH8.0）中和NaOH，作为模板，引物序列为：

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凝胶电泳：4.5g高纯度琼脂糖＋300ml TAE，微波炉中加热5min，摇匀，再次加热2min，取出，加入15μl EB，倒入电泳槽内（20孔梳子），冷却备用。将PCR产物取10μl，加5×loading buffer 2μl，混匀，上样，用1.5%琼脂糖胶100V，电泳1h，用凝胶成像系统拍照。

小鼠基因型判定：（1：A＋B 2：A＋C）