2.4.3　RND3与NICD结合

为了探讨RND3调节NICD的机制，我们首先检测了高表达RND3时Notch1（NICD由Notch1经γ-分泌酶剪切生成）的mRNA表达水平，结果发现，Notch1的mRNA表达没有明显变化（图2-27C），提示RND3调节NICD可能通过转录后调节。我们之前已经发现，RND3与NICD表达位置相同，因此，RND3可能与NICD结合。为了验证这一假说，我们转染Flag-NICD与Myc-RND3的质粒到U251细胞中，应用免疫共沉淀检测两者是否相互结合。免疫沉淀结果显示，在Myc-RND3沉淀的蛋白中，可以检测到Flag-NICD，在Flag-NICD沉淀的蛋白中，可以检测到Myc-RND3（图2-27B）。因此，RND3可能通过与NICD的结合调节NICD的表达水平。

(https://www.daowen.com)

图2-27　RND3调节Notch1信号通路的机制

A：RND3和Notch1在人脑GBM与GBM细胞U251中的亚细胞定位；B：RND3与NICD的沉淀结果；C：高表达RND3后Notch1的mRNA表达水平；D：高表达和低表达RND3后细胞核内NICD的表达量。