2.4.10　RND3调节NICD表达量是RND3调节Notch1信号通路的关键

目前已经证实，Notch1在调节GBM细胞增殖中发挥关键作用[21]，本研究发现，RND3可以通过调节NICD-CSL-MAML 1集团调节Notch1信号通路进而调节GBM细胞增殖，但RND3对NICD调节在这一过程中的作用依然未知。为了探讨RND3调节NICD在RND3调节NICD-CSL-MAML 1集团中的作用，我们使用逆转实验来进行研究。结果显示，在U251细胞中，高表达RND3（GFPRND3组），HES1的mRNA表达明显降低，与对照组（GFP组）相比，差异有统计学意义（P＜0.001）。而同时高表达RND3与Flag-NICD（GFP-RND3＋Flag-NICD组），HES1的mRNA表达量与对照组（GFP组）相比，差异无统计学意义（P＝0.3121＞0.05）（图2-30C），说明NICD可以完全逆转RND3对NICD-CSL-MAML 1集团的作用。在U251细胞中，敲低RND3（siRND3），HES1的mRNA表达量明显升高，与对照组相比，差异有统计学意义（P＝0.02529＜0.05）。然而，当U251细胞中不存在Notch1表达时（siNotch1），敲低RND3（siRND3），HES1的mRNA表达量无明显改变。与对照组相比，差异无统计学意义（P＝0.2118＞0.05）（图2-30B），说明在缺少NICD的情况下，RND3无法实现对NICD-CSL-MAML 1集团的调节。为了验证RND3与NICD的关系，我们收集了15例人脑GBM组织与15例正常脑组织，并检测了RND3与NICD表达量，结果发现，RND3蛋白表达量与NICD蛋白表达量呈现负相关（R＝-0.6003），具有统计学意义（P＝0.0002＜0.05）（图2-33），提示RND3在人脑GBM中调节NICD表达。总之，以上证据强有力的说明，RND3负性调节NICD表达量在RND3调节Notch1信号通路中起到关键作用。

(https://www.daowen.com)

图2-29　RND3与MAML1的关系

A：RND3和MAML1在U251细胞中的亚细胞定位；B：RND3与MAML1的相互沉淀；C：高表达RND3后，MAML1的mRNA表达量；D：高表达RND3后，MAML1的蛋白表达量。