（五）监测方法

2026年06月02日

版权

（五）监测方法

1.蚊虫抗药性测定

用WHO推荐使用的幼虫浸渍法和成蚊接触筒法（参考GB/T 26347—2010）分别测定幼虫和成蚊的抗药性。幼虫测定3龄末至4龄初幼虫对常用杀虫剂的LC50。成蚊用诊断剂量测定其24小时死亡率。

（1）蚊虫的采集和饲养

在当地有代表性的区域（如东、西、南、北、中不同方位，或者某一个特定区域），根据蚊虫的吸血活动、栖息和滋生环境采集蚊虫。按列出的项目，记录采集时间、地点、经纬度、采集数量和虫态等信息。试虫采集后，根据蚊虫的滋生习性、成蚊或4龄幼虫形态学特征，鉴定种类，进行常规饲养。

（2）成蚊抗药性测定

把恢复筒与隔板连接，用吸蚊管取20～30只羽化后3～5天的健康雌蚊（中华按蚊用采自野外的健康雌蚊）放入恢复筒中，平行放置15min，剔除不健康蚊虫。在隔板另一面装上已衬贴药纸（可自制、购买，或由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供）的接触筒，使恢复筒在下面，竖直放置，轻轻拍打使蚊虫聚集于恢复筒底部，然后瞬间把隔板抽开，颠倒接触筒与恢复筒位置，将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒，迅速关上隔板。将筒平放，即开始计算接触时间。

试虫死亡的判断标准：试虫完全不动，或仅躯体、足、翅或触角等震颤而无存活的可能性，视为死亡。若对照死亡率超过20%，试验视为无效，重新测定。结果用死亡率表述：

对照组死亡率小于5%无须校正，对照组死亡率在5%～20%之间，用Abbott公式进行校正。

抗性水平判断标准：在诊断剂量下，蚊虫的死亡率在98%～100%表明其为敏感种群；死亡率在80%～98%（不含）表明其为可能抗性种群；死亡率＜80%表明其为抗性种群。

（3）幼虫浸渍法测定

用丙酮配制杀虫剂的5～7个系列浓度；取相应数量的烧杯，各加入200mL脱氯水，并用微量移液器吸去100μL；首先在对照组烧杯加入100μL丙酮，再依次向各试验组中加入100μL浓度药液，用玻璃棒或磁力搅拌器，按照对照、低浓度、高浓度的次序搅拌均匀。每个浓度设置至少3个重复。

用幼虫吸管，吸取3龄末至4龄初幼虫，用小漏勺将水滤掉，按照对照组、低浓度组到高浓度组依次分别加入20只幼虫。放入设定好的温度〔（25±1）℃〕和湿度〔（70±10）%〕的培养箱或房间中，24小时后查看蚊虫的死亡情况。

测定信息和结果记录见附表29，获得毒力回归线、致死中浓度、斜率值、卡方值等数据，计算抗性倍数（RR）。

RR=待测种群LC50值/敏感种群LC50值

可参考如下标准判断抗药性水平：RR＜3为敏感，3≤RR＜10为低抗，10≤RR＜40为中抗，RR≥40为高抗。

2.家蝇抗药性测定

家蝇的抗药性测定采用WHO推荐的点滴法（参考GB/T 26350—2010）。

（1）采集和饲养

用网捕或笼诱等方法，在代表性区域采集成蝇，也可以在养殖场挖取采集幼虫（蛆）。从采集到的蝇类中挑选家蝇，在室内按照常规方法饲养。

（2）杀虫剂配制

用丙酮将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度（通过预试验确定药剂的浓度范围，最低浓度时死亡率小于10%，最高浓度时大于80%）。

（3）测定和恢复环境

温度：（25±1）℃；光周期：14 L，10D；相对湿度：60%～70%。

（4）测定方法

将试虫用乙醚或C02等麻醉至昏迷。用点滴器将0.3μL左右杀虫药剂溶液点滴在雌性家蝇前胸背板上。每个处理组点滴30只羽化后3～5天的雌性家蝇，以相应溶剂点滴为空白对照，试验重复3次。将受药后的试虫转入清洁容器内，供给水和食物，正常饲养，24小时后统计死亡情况。凡腹部上翻、六足抽搐、用锐器触之不能翻身爬行者判为死亡。根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程，根据回归方程求出LD50值。

（5）抗药性水平判定标准(https://www.daowen.com)

敏感品系和测定样本95%置信区间不重叠，且抗性倍数≥5为抗性种群。

3.德国小蠊抗药性测定

采用药膜法，参见GB/T 26352—2010。

（1）采集和饲养

用诱捕器（内部放置诱饵）、捕蟑器或粘蟑板等在所选生境采集试虫，数量不少于50只，常规饲养。

（2）抗药性测定

用丙酮或其他的有机溶剂将杀虫剂原液逐级稀释到所需浓度，取2.5mL药液加入500mL锥形瓶中，不断转动锥形瓶，使药液均匀分布于瓶内壁，置于通风橱中过夜，使有机溶剂全部挥发。

每瓶放入试虫10只，用纱网或纱布封口。试验重复10次，以相应溶剂处理作为对照组。24小时后记录每次以及对照组的死亡数。试虫不能正常爬行或者完全不动视为死亡，可用器具碰触试虫查看其反应。

（3）结果计算