表达产物的稳定性

三、表达产物的稳定性

①组建融合基因,产生融合蛋白。融合蛋白的载体部分通过构象的改变,使外源蛋白不被选择性降解。这种通过产生融合蛋白表达外源基因,特别是相对分子质量较小的多肽或蛋白编码的基因,尤为合适。

②产生可分泌的蛋白。如将外源基因表达产物分泌到大肠杆菌细胞的周围或直接分泌到培养基。

③外源蛋白可以在宿主细胞中以包涵体形式表达,这种不溶性的沉淀复合物可以抵抗宿主细胞中蛋白水解酶的降解,也便于纯化。

④选用蛋白酶缺陷型大肠杆菌为宿主细胞,有可能减弱表达产物的降解。

⑤采用位点特异性突变方法,改变真核蛋白二硫键的位置,从而增加蛋白质的稳定性。