2.1.2 两栖类标本的采集、制作与保存
一、两栖动物采集
武夷山的两栖动物约200种，大多分布在溪流沿岸和山涧旁，少数分布在茶园和森林地区，海拔在500～1 200米之内。
（一）两栖类的活动规律
两栖类的活动规律主要表现在季节性活动和昼夜活动两个方面。
（1）季节性活动。武夷山地区的两栖类一般在2—4月结束冬眠，开始苏醒；个别早的（如中华大蟾蜍）在1月、晚的（黑斑蛙和泽蚌）在4月苏醒。有些种类苏醒后即进入繁殖期，如大蟾蜍。有些种类（如泽蛙）需到春夏两季才进入繁殖、生长发育和觅食主要时期。挂墩角蟾则在10月进入繁殖产卵期。
（2）昼夜活动。无尾两栖类大多在夜间活动，它们白天匿居于隐蔽处，以躲避炎热天气。例如，大蟾蜍常匿居于杂草丛生的凹穴内，黑斑蛙多匿居下草丛中，等等。黎明前或黄昏时活动较强，雨后更加活跃，但少数种类（如泽蛙）则在白昼活动。有尾两栖类一般也多在夜间活动。例如，大鲵白天潜居在有回流水的细沙的洞穴内，傍晚或夜间出洞活动，只有在气温较高的天气，才在白天离水上陆、在岸边活动。
（二）两栖类的采集
动物的采集是研究动物变异、分布和生活史等的基础工作。进行采集时，应该注意如下4个问题。
（1）采集活动应事先征求武夷山国家级自然保护区管理局的许可。不得采集法定保护动物（如大鲵）等。
（2）事先准备好装存用具。有尾类和小型蛙类可装入广口瓶中，瓶盖最好穿孔，以保证动物不死。瓶内还需要放进少量的水以保持湿度，但不能多到埋着动物的头部。大型蛙类最好装在布袋内，还需要把袋子弄湿。就近采集可以准备带盖的塑料桶装存。
（3）事先根据所采集的动物栖息环境选好采集目的地。
（4）尽量使用最简便的采集方法。最简便的方法是用手捕。捉蛙类时，要用手握住蛙后肢前面身体的全部。握有尾两栖类时，捏颈部或握躯干均可，但不可触及尾部，有些种类的尾部很容易折断。
（三）采集用具
（1）钉耙和钩。钉耙和钩是翻覆盖物、寻找标本的必要工具。
（2）头灯或强光手电筒。头灯或强光手电筒是进行夜间采集的重要工具。许多两栖类在人工光线照射之下并不惊动，蛙类常继续鸣叫。但是，在要接近它们的时候必须尽量不发出任何声响，否则它们就会很快逃脱。
（3）水网。网眼大小要适于打捞蝌蚪或有尾类幼体，网底要比网口宽得多，并且从网口到网底要尽可能深些，以防止入网的大青蛙跳出。
（4）拦网。需要两个人各执网的一端，必须注意动物不能从网底逃脱。拦网宜于在小河或溪水中使用，采集人需要从上流翻动水底所有石块及其他障碍物，把动物赶入网内。
（5）钓竿。钓竿类似钓鱼竿，可用以钓捕较大的水生种类，如大型蛙类。用肉或鱼作饵，偶尔也可钓到有尾类幼体。钓大的个体时，必须用金属引线。
（四）采集的时间和环境
（1）采集时间。武夷山地区的2—10月，都有两栖类进行繁殖。尤其是3—7月，进行繁殖的种类最多，是采集的最好时期。在傍晚19:30至深夜24:00点之间，雌、雄成体会集到水域或近水域场所，活动频繁，觅食、相互抱对产卵，此时不仅可采到许多成体，也可采集卵块和蝌蚪。
（2）采集环境。适合采集两栖类的环境，一般是草木繁茂、昆虫滋生、溪流、池塘和山涧较多的地方。在这样的环境中，两栖类的种类和个体数目最多。
（五）采集方法
1.无尾两栖类的采集方法
对活动能力较弱的种类（如大蟾蜍、花背蟾蜍和中国林蛙），可用手直接捕捉。对水中活动和跳跃能力较强的种类（如黑斑蛙、金线蛙、蝾螈等），可用网捕捉。有些种类栖息于洞穴、水边或稻田草丛中（如虎纹蛙），可用钓竿进行诱捕。诱捕时，一手持钓竿，不时抖动钓饵，诱蛙捕食。蛙类具有吞食后不轻易松口的特点，可以利用这一特点进行捕捉。
无尾两栖类在夜间行动迟缓，尤其在手电筒照射时，往往呆若木鸡，很好捕捉。但夜间路途难行，采集者如果道路不熟悉，容易落入水中。因此，组织学生采集两栖类时，应安排在白天进行，以防止发生意外。
2.有尾两栖类的采集方法
有尾两栖类大多为水栖，而且大多栖居在高山溪流的浅水中，白天多潜伏在有枯枝、落叶的石块下或石缝中。可在白天翻动石块寻找。有些种类生活在山区水塘中（如肥螈、瘰螈等），当水清时，常能从水上看到它们。这些种类性情温和，游动缓慢，可用手捕捉或用网捕捞。
二、颜色记录和照像
两栖动物死后颜色常会改变。所有两栖类在福尔马林和酒精中保存一个时期以后都将褪色，因此，在杀死这些动物以前，应当把身体各部分的颜色确切地记录下来。如果可能，还应当进行彩色拍照。
三、杀死
杀死、测量和固定保存的工作可在室内进行。在进行保存以前，先把动物杀死非常重要。因为把动物直接投入保存液中，动物将会因为强烈疼痛而僵硬收缩。杀死的动物在刚刚死后身体是舒展的，便于进行测量，也便于随心所欲地把它安排在盛有保存液的容器内。
乙醚是最好的杀伤药。把少量乙醚注入盛放动物的玻璃瓶中，然后把盖盖紧，在15～30分钟的时间内，动物多半死亡。如果乙醚的量过少或过早地把动物从瓶中取出，动物就会苏醒。44～49℃的温水可以杀死两栖类。把装有动物的布袋整个放入盛有温水的容器中，等动物死后立刻从袋内取出，否则，时间过久动物即保持死时的姿态而不能舒展。
另外，使用盐酸普鲁卡因数片，每片含药0.07 g，配成10%水溶液，在心脏处每体重1 g注射0.05 mL（含药0.47 mg），注入动物体内可以致死。把两栖类投入药液中，也可达到同样效果。
四、标本的测量
（一）测量用具和用品
体长板用于测量成体各部分长度，其规格和质地与测量鱼类的体长板相同。号签应当是吸收墨汁能力很强的优质纸，亦可由布条或小木牌代替，用墨汁或软铅笔书写。另外，还有记录本、铅笔等。
不同地区的同一物种应当分组保存，并各有相应记录，记录也应分开。每次采集均应有标本编号。
每天在同一地点采到的同一物种可以个体编号，也可以集体编号，但每个标本都应挂标签。同组标本常放在同一容器之内，或者用纱布包裹和其他标本共放在一个大的容器中，绝不可把不同的两组标本混在一起。编号在标本的标签、编号簿和野外记录册上必须一致。编号簿上应有主要记录，记录册上应有测量数据。
在标签纸背面应写上物种的拉丁文名称、雌雄和成幼等。如标签纸较大，也可从野外记录册上摘要记载习性、量度或其他资料。
（二）测量准备工作
将需做标本的动物用清水洗涤干净，系好号签。
（三）测量内容
1.无尾两栖类的主要测量部位
（1）体长——自吻端至体后端。
（2）头长——自吻端至上、下颌关节后缘。
（3）头宽——左右关节之间的距离。
（4）吻长——自吻端至眼前角。(https://www.daowen.com)
（5）前臂及手长——自肘关节至第三指末端。
（6）后肢长——自体后端正中部分至第四趾末端。
（7）胫长——胫部两端间的长度。
（8）足长——内趾突至第四趾末端。
2.有尾两栖类的主要测量部位
（1）体长——自吻端至尾端。
（2）头长——自吻端至颈褶。
（3）头宽——左右颈褶间的距离（或头部最宽处）。
（4）吻长——自吻端至眼前角。
（5）尾长——自肛孔后缘至尾末端。
（6）尾宽——尾基部最宽处。
（四）记录
按两栖类动物的采集情况及数据进行记录。
五、标本的制作
两栖类大多根据外形和内部骨骼特点进行分类检索。因此，在采集和测量记录之后，应制作浸制标本和骨骼标本。现以蛙类为例，说明标本制作过程。
（一）浸制标本制作
1.用具用品
（1）解剖盘、标本瓶、注射器。用于盛放标本和向标本注射固定液。
（2）福尔马林溶液（甲醛溶液）。用于固定和保存标本。
通常是把整个个体置于液体保存剂中。福尔马林溶液是保存液中最为恰当的一种。一般市售的福尔马林是含37%甲醛气体的水溶液。保存标本时要把买到的福尔马林以100%看待，再加水配成10%溶液使用。龟类必须经常保存在10%福尔马林溶液之中。其他（如蛇、蜥蜴等）两栖动物在经过药液体内注射之后，可保存在5%福尔马林溶液中，但必须在24小时后更换一次新液，最后把蛇和蜥蜴保存在5%福尔马林溶液内。把其他两栖类保存在3%福尔马林溶液内。
福尔马林具有强烈刺激气味，能够引起某些人产生明显的不适反应。福尔马林的衍生物——对甲醛呈固态，便于装运，可随时配成10%福尔马林溶液应用。没有福尔马林溶液，亦可使用乙醇溶液，所谓纯酒精实际上是50%乙醇溶液。95%乙醇溶液和70%乙醇溶液可分别作为爬行类和两栖类的最初保存剂。在标本放进乙醇溶液之后的前几天，必须一再检查动物身上是否有未被浸泡好的区域。浸泡爬行类在24～48小时后应更换一次新液，如果把两栖类最初也放在95%乙醇溶液中，应在24～48小时后换入70%乙醇溶液中。假如连乙醇溶液也没有，可把标本暂时保存在近于饱和的食盐水中（水1000mL，食盐约80g）。用乙醇溶液或盐水保存的标本应该及早设法包装寄往目的地，在未寄出之前要不断更换新液，防止标本腐烂。
2.制作方法步骤
浸制标本的制作方法比较简单，只需经过固定和保存两个步骤。
（1）固定。将已处死的标本放置在解剖盘上，先向腹内注射适量的5%～10%福尔马林溶液，再放入盛有5%～10%福尔马林溶液的标本瓶中进行固定，固定时应将标本的背部朝上，四肢做成生活时的匍匐状态，并将指、趾伸展好。固定时间需数小时至1天。
（2）保存。将标本放入5%福尔马林溶液或70%乙醇溶液中浸泡保存。
（二）骨骼标本制作
1.用具用品
（1）解剖刀、解剖剪、镊子。用于剔除软组织。
（2）玻璃水槽、解剖盘。用于制作过程中盛放标本。
（3）卡片纸、大头针、胶水。用于对标本进行定形和固定。
（4）标本台板。用于放置骨骼标本，一般用木板制成。
（5）0.5%～0.8%氢氧化钠溶液。用于腐蚀标本上的残存肌肉。
（6）汽油。用于脱掉标本上的脂肪。
（7）3%过氧化氢。用于漂白标本。
2.制作方法步骤
骨骼标本的制作方法比较复杂，需要经过剔除软组织、腐蚀、脱脂、漂白、整形和装架等步骤。
（1）剔除软组织。包括剥皮、去内脏和剔肌肉3个内容。剥皮应从腹部开始，用剪刀剖开腹部皮肤，陆续剥向身体各部。在剥皮过程中，注意不要拉断指骨和趾骨。皮肤剥净后，再挖掉内脏和眼球，随后进行剔肉。剔肉时，不要将头骨、肩带和四肢骨的各个关节相连的韧带剔掉，以借助韧带保持各关节的联系。当肌肉基本剔净后，在颈椎和枕骨之间的缝隙中，向颅腔插入适当粗细的铅丝，将脑组织破坏，再将铅丝插入椎骨，将脊髓挤压出来。然后，用水将标本冲洗干净。
（2）腐蚀。将已剔除软组织的骨骼浸入0.5%～0.8%氢氧化钠中，腐蚀残存的软组织。1～3天后取出，在清水中进行冲洗。此时，骨骼上的软组织已被腐蚀干净。
（3）脱脂。将经过腐蚀的骨骼，放入汽油中进行脱脂。脱脂时间需1～2天。
（4）漂白。将已脱脂的骨骼浸泡在3%过氧化氢溶液中，进行漂白。漂白时间需1～4天，在漂白期间要经常检查，只要标本已经洁白，就要及时取出。
（5）整形。将已漂白的骨骼平放在木板或泡沫塑料板上，将躯体和四肢按自然姿态整理好，并用卡片纸条和大头针固定在板上，以防止标本在干燥过程中变形。在下颌和胸椎骨下面，要用纸团垫起，使其成生活时头部抬起的状态。还要将两个上肩胛骨附着在第二、第三颈椎横突的两侧，待骨骼干燥后，用胶水黏住，使全副骨骼连成一个整体。
（6）装架。将上述已整形的骨骼，放在标本台板上，用胶水将前肢的腕骨和后肢的跖骨黏在标本台板上，贴上标签，写明编号、名称、采集时间、采集地点、采集人、制作人，即可保存备用。
六、活动物的照管
（1）成体和幼体。为观察动物的行为、配对、产卵或颜色变化，在杀死保存之前，常常需要使它们生活一个短暂时期。陆生种类需要一个小水盘和一个供爬行的器具。水生种类可放进带有水草的水缸中，缸中放一块突出水面的岩石，提供它们爬出水面的机会。在数天到1周的短时间内，动物不吃东西可以生活。青蛙和蟾蜍可以喂活的昆虫，有尾类可以喂蚯蚓。
（2）蝌蚪和有尾类早期幼体。可饲养在浅盘中，最初加入原生活处的水，以后只需加入普通用水即可。也可加入水生植物。蝌蚪喂以藻类、水草或嫩菠菜，有尾类幼体喂以生牛肉碎片或蚯蚓小段。当它们进行变态时，需要在饲养盘中安放突出水面的石头或砖块，使它们有可能爬出水面，否则它们将被淹死。
（3）卵两栖类的卵可放置在盛有池水的容器中。孵化出的蝌蚪或幼体需要取出放入另一容器中，如果不进行分离，将会造成拥挤、使卵腐坏。
