附录 操作实践
附录 操作实践
实践1 消毒
【知识目标】
了解消毒的种类；掌握消毒方法和常用消毒剂的应用。
【技能目标】
掌握喷雾器、火焰喷灯等消毒器械的使用方法；学会常用消毒液的配制方法；能正确地对宠物圈舍、笼具、用具、地面和粪便进行消毒。
【实践内容】
常用消毒器材的使用；常用消毒剂的配制方法；常用的消毒法；消毒效果的检查评价。
【材料准备】
1.器材 喷雾器、天平或台秤、盆、桶、缸、清扫洗刷用具、高筒胶鞋、工作服、橡胶手套等。
2.药品 新鲜生石灰、粗制氢氧化钠、漂白粉、来苏儿、高锰酸钾、福尔马林等。
3.实训场地 传染病实验室、宠物饲养场等。
【方法步骤】
可先由教师或现场指导教师操作示教，然后由学生操作。
1.常用消毒器材的使用
（1）喷雾器。喷雾器有两种，即手动喷雾器和机动喷雾器。手动喷雾器分为背携式（压力式）和手压式（单管式）两种，常用于小面积的消毒。机动喷雾器有背携式和担架式两种，常用于大面积的消毒。喷雾前要对其各部分进行仔细检查，尤其注意喷头部分有无堵塞现象。消毒液必须先在桶内充分溶解，经过滤后装入喷雾器。消毒完后立即将剩余的药液倒出，用清水将喷雾器洗净晾干。喷雾器的打气筒及零件应注意维修。
（2）火焰喷灯。火焰喷灯是用汽油或煤油作燃料的一种工业用喷灯。喷出的火焰具有很高的温度。消毒效果较好，用于消毒各种被病原体污染的金属笼具及其他用品，但应注意不要喷烧太久，以免将消毒物品烧坏。消毒时应按一定的顺序进行，以免遗漏。
2.消毒剂的配制方法 为了满足生产、贮存和运输等各环节的需要，大多数消毒剂都是以高浓度、结晶体或粉剂等形式进行生产和销售的，必须进行稀释配制或经其他形式处理后才能正常使用。这就涉及消毒剂的配制问题。
消毒剂浓度表示法有百分浓度、比例浓度、摩尔浓度等。实际消毒工作中，常用百分浓度和比例浓度。百分浓度即每100 g或每100 mL药中含某药纯品的质量（g）或体积（mL）。比例浓度表示1份溶质相当于溶液的份数，以比例表示，例如，溶液标为1∶10，就是指固体（或气体）溶质1g或液体溶质1 mL加溶剂配成10 g或10 mL的溶液。
（1）配制要求。所需药品应准确称量。配制浓度应符合消毒要求，不得随意加大或减小。使药品完全溶解，混合均匀。
（2）配制过程。先将稀释药品所需要的水倒入配制容器（盆、桶或缸）中，再将已称量的药品倒入水中混合均匀或完全溶解即成待用消毒液。
（3）常用消毒液的配制。
①5％氢氧化钠的配制。称取50 g氢氧化钠，加入适量常水（最好用60～70℃的热水）中，搅拌使其溶解，加水至1000 mL即得。
②0.1％高锰酸钾的配制。称取1g高锰酸钾，加水1000 mL，使其充分溶解即得。
③3％来苏儿的配制。取来苏儿3份，加清水97份，混合均匀即成。
④碘酊的配制。称取碘化钾15 g，加蒸馏水20 mL溶解后，再加碘片20 g及95％乙醇500 mL，搅拌使其充分溶解，再加入蒸馏水至1000 mL，搅匀，过滤即得。
⑤碘甘油的配制。称取碘化钾10 g，加入10 mL蒸馏水溶解后，再加碘10 g，使其充分溶解后，加入甘油至1000 mL，搅匀即得。
⑥高浓度溶液配制低浓度溶液。可用稀释法，用下列稀释公式进行计算：
A∶B=V∶X
X=VB/A
式中：A为浓溶液的浓度；B为稀溶液的浓度；V为欲配制稀溶液的量；X为需要浓溶液的量。
例如，欲配75％的乙醇1000 mL，需用95％乙醇多少mL？
代入公式，得
X=1000×75％/95％
即取95％乙醇789.5 mL，加水稀释至1000 mL，即为75％乙醇。
⑦熟石灰（消石灰）的配制。生石灰（氧化钙）1 kg，加水350 mL，生成粉末状物即为熟石灰。可撒布于阴湿地面、污水池、粪池周围等处消毒。
⑧20％石灰乳的配制。1 kg生石灰加5 kg水即为20％石灰乳。配制时最好用瓷缸或木桶等容器。首先把少量水（350 mL）缓慢加入生石灰内，稍停，使石灰变为粉状的熟石灰时，再加入余下的4650 mL水，搅匀即成20％石灰乳。
⑨漂白粉乳剂及澄清液的配制。首先在漂白粉中加入少量的水，充分搅拌成糊状，然后按所需的浓度加入全部水（最好25℃的温水）。
20％漂白粉乳剂：每1000 mL水加漂白粉200 g（含有效氯25％），混匀即得。
20％漂白粉澄清液：把20％漂白粉乳剂静置一段时间，上层液即为20％漂白粉澄清液，使用时可稀释成所需浓度。
⑩1∶100菌毒敌消毒剂的配制。药物原液1份加水99份，拌匀即可。若配制浓度低于1∶100时，1份常可忽略不计。如配制1∶1000菌毒敌、百毒杀、菌毒灭时，即药物原液1份加水1000份，拌匀即可。
（4）配制注意事项。药品应充分溶解；药量、水量和药与水的比例应准确；配制消毒液的容器必须干净；注意检查消毒药品的有效浓度；配制好的消毒药品不能久放，应现用现配。某些消毒药品（如生石灰）遇水会产生高温，应在搪瓷桶、盆或铁锅中配制；配制有腐蚀性的消毒药品（如氢氧化钠）时，应戴橡胶手套操作，严禁用手直接接触，以免灼伤；对配制好的有腐蚀性的消毒液，应选择塑料或搪瓷桶、盆贮存备用，严禁贮存于金属容器中，避免损坏容器。
3.常用的消毒方法
（1）人员的消毒。进入宠物养殖场的人员，必须在场门口更换鞋子，在消毒池内进行消毒。在消毒室内洗澡、更换衣物，穿戴清洁消毒好的工作服、帽和鞋，经消毒后进入生产区。消毒室经常保持干净、整洁。工作服、鞋、帽和更衣室定期洗刷消毒。
（2）栏舍、用具消毒。
第一步：先对圈舍地面、用具等进行彻底清理。清理前用清水或消毒液喷洒，以免灰尘及病原体飞扬，随后扫除粪便等污物，水泥地面的圈舍再用清水冲洗。
第二步：用化学消毒剂进行消毒，消毒液用量一般按1000 mL/m2计算。消毒时先由远门处开始，对天棚、墙壁、用具和地面按顺序均匀喷洒，然后到门口，最后打开门窗通风，用清水洗刷用具等除去消毒药味。
化学药物熏蒸消毒：常用福尔马林，其用量按照圈舍空间计算，福尔马林25 mL/m3，水12.5 mL/m3，两者混合后再放高锰酸钾（或生石灰）25 g/m3。消毒前将动物赶出圈舍；舍内的管理用具、物品等适当摆开，门窗密闭，室温不得低于正常室温（15～18℃）。药物反应可在陶瓷容器中进行，用木棒搅拌，经几秒钟即可产生甲醛蒸气。经12～24 h将门窗打开通风，药气消失后，才能将动物迁入。
（3）地面土壤消毒。患病动物停留过的圈舍、运动场等，先除去表土，清除粪便和垃圾。小面积的地面土壤可用消毒液喷洒。大面积的土壤可翻地，在翻地的同时撒上干漂白粉，一般传染病用量为0.5 kg/m2，炭疽等芽孢杆菌性传染病用量为5 kg/m2，漂白粉与土混合后加水湿润压平。
（4）粪便的消毒。
①化学药品消毒法。用含2％～5％有效氯的漂白粉溶液或20％石灰乳，与粪便混合消毒。
②掩埋法。将污染的粪便与漂白粉或生石灰混合后，深埋于地下2 m左右。
③焚烧法。污染粪便不多时，可架起一层铁梁，铁梁下面放置木材和汽油，铁梁上面放置欲消毒的粪便，如粪便太湿，可混合一些干草，以便烧毁。
④生物热消毒法。有发酵池法和堆粪法。
a.发酵池法。在距水源、居民点及养殖场一定距离处（200～250 m）挖池，大小视粪便多少而定。池底和池壁可用砖和水泥砌好，使之不透水。用时池底先垫一层土，每日清除的粪便倒入池内，直到快满时，在粪便表面铺一层干草或杂草，上面盖一层泥土封好，经1～3个月发酵后作肥料用。也可利用沼气发酵池进行消毒。
b.堆粪法。在距场舍100～200 m以外的地方选一个堆粪场。在地面挖一条浅沟，深约50 cm，宽1.5～2 m，长度随粪便多少而定。先将非粪便或蒿草等堆至25 cm，再堆欲消毒的粪便，高达1～1.5 m后，在粪堆的外面铺一层10 cm厚的非污染性粪便或谷草，最外层抹上10 cm厚的泥土。堆放3周到3个月，即可做肥料用。
4.污水的处理 污水的处理有沉淀法、过滤法、化学药品消毒法。常用的消毒法是漂白粉消毒法，用量是每立方米水用有效氯为25％，漂白粉6g（清水）或8～10 g（混浊的水）。
5.消毒效果的检查评价 在实际操作过程中，多种因素都会影响消毒效果。对于是否达到消毒的预期效果，一般情况下可从以下几个方面进行评定。
（1）房舍、用具、设备清除效果的检查评价。查看地板、墙壁、设备、用具的清洁度，评价管理用具的消毒确实程度，评价粪便的消毒方法。
（2）消毒剂选择正确性的检查。检查工作记录表，了解消毒剂的种类、浓度、温度及每平方米所用的量等，确定是否根据消毒对象的特性选用消毒剂、最佳浓度和消毒法。
（3）消毒对象的细菌学检查。有条件的可应用细菌直接检查方法，看是否达到要求。从消毒过的地板、墙壁、墙角及用具上取样品，进行细菌学检查测定微生物数量及大肠杆菌价。
（4）粪便生物热消毒效果检查。常用装在金属套管内的温度表测定粪便的温度，由温度高低评价消毒效果。
【注意事项】
进行消毒时注意人员防护，如配制消毒药时要防止生石灰溅入眼中；漂白粉消毒时防止引起结膜炎和呼吸道炎；注意防止病原微生物散播；宠物食具及饮水器应选用气味小的消毒药。
【实践报告】
写一份消毒工作报告。
实践2 宠物传染病的免疫接种
【知识目标】
了解免疫接种的相关概念；掌握免疫接种程序；掌握免疫接种的注意事项。
【技能目标】
能正确给宠物进行免疫接种；了解生物制剂的保存、运送和用前检查；能根据要求对各种疫苗进行稀释操作和免疫接种。
【实践内容】
预防接种前的准备；生物制剂的保存、运送和用前检查；免疫接种的方法；免疫接种前后的护理和观察。
【材料准备】
1.器材 金属注射器（5 mL、10 mL、20 mL等规格）、玻璃注射器（1 mL、2 mL、5 mL等规格）、金属皮内注射器、针头、煮沸消毒锅、镊子、毛剪、体温计、脸盆、毛巾、纱布、脱脂棉、搪瓷盘、出诊箱、工作服、登记卡片、动物保定用具。
2.药品 5％碘酊、70％乙醇、来苏儿或新洁尔灭等消毒剂，疫苗，免疫血清。
3.实训场地 传染病实验室、宠物饲养场等。
【方法步骤】
可先由教师或现场指导教师操作示教，然后由学生操作。
1.预防接种前的准备
（1）根据动物疫病免疫接种计划，统计接种对象及数目，确定接种日期（应在疫病流行季节前进行接种），准备足够的生物制剂、器材和药品，编制登记表册或卡片。
（2）免疫接种前，必须对所使用的生物制剂进行仔细检查，不符合要求者一律不能使用。
（3）为保证免疫接种的安全和效果，接种前应对预定接种的宠物进行了解及临床观察，必要时进行体温检查。凡体质过于瘦弱、妊娠后期、未断奶、体温升高或疑似患病的宠物，均不宜接种疫苗。另外，经过长途运输或改换饲养环境或方法的宠物也不宜接种疫苗。对这类未接种疫苗的宠物，以后应及时补种。
2.生物制剂的保存、运送和用前检查
（1）生物制剂的保存。各种生物制剂均应保存在低温、阴暗及干燥的场所。疫苗、类毒素、免疫血清等应保存在2～15℃的环境中，防止冻结；病毒性疫苗应在0℃以下冻结保存。在不同温度条件下保存，不得超过所规定的期限；超过有效期的制剂均不能使用。
（2）生物制剂的运送。要求包装完善，防止散播活的弱毒病原微生物。运送途中避免日光直射和高温，并尽快送到保存地点或预防接种场所。弱毒疫苗应在低温条件下运送，大量运送应用冷藏车，少量运送可装在装有冰块的广口瓶内，以免疫苗的性能降低或丧失。
（3）生物制剂的用前检查。各种生物制剂用前均需仔细检查，有下列情况之一者不得使用：①没有瓶签或瓶签模糊不清，没有经过合格检查者；②过期失效者；③生物制剂的质量与说明书不符者，如色泽、沉淀、制剂内异物、发霉或有臭味者；④瓶封口不紧或玻璃破裂者；⑤没有按规定方法保存者，如加氢氧化铝的菌苗经过冻结后，其免疫力可降低。
3.免疫接种的方法 根据不同生物制剂的使用要求采用相应的接种方法。
（1）点眼滴鼻免疫法。用滴管或注射器吸取疫苗滴于鼻孔或眼内。
（2）皮下注射法。选择部位应为皮肤松弛、皮下结缔组织丰富的部位。犬常在颈部或背部皮下；鸟类在胸部或大腿内侧。要根据药液黏稠度及动物大小，选用合适的注射针头。
（3）肌肉接种法。选择部位应在肌肉丰富、神经和血管分布较少的部位。哺乳动物一般采用臀部或颈部肌内注射；犬采用颈部肌内注射或股内侧肌内注射，有时可在背部肌内注射；鸟类在胸部肌内注射。
（4）经口免疫法。将可供口服的疫苗混于水中或食物中，动物通过饮水或采食而获得免疫，称为经口免疫。经口免疫时，应按动物头（只）数和每头（只）动物平均饮水量或采食量，准确计算需用的疫苗剂量。免疫前应停饮或停喂数小时，以保证每头（只）动物都能饮用一定量的水或吃入一定量的食物；混合疫苗用水和食物的温度以不超过室温为宜；稀释疫苗的水应纯净，不能含有消毒药；已经混合好的饮水和食物，进入动物体内的时间越短其效果越好。
4.免疫接种前后的护理和观察
（1）接种前的健康检查。在对宠物进行免疫接种时，必须注意宠物的营养和健康状况，进行一般性检查（包括体温检查）。根据检查结果将宠物分成数组。完全健康的宠物可进行自动免疫接种；衰弱、妊娠后期的宠物不能进行自动免疫接种，而应注射免疫血清；疑似患病宠物和发热宠物应注射治疗量的免疫血清。上述分组规定可根据疫病的特性和接种方法而变动。
（2）接种后的观察和护理。宠物接受免疫接种后，可发生暂时性的抵抗力降低现象，故应有较好的护理和管理措施，同时必须特别注意必要的休息和营养补充。有时宠物在免疫接种后发生反应，故应仔细观察，期限一般为7～10 d。如有反应，可根据情况给以适当治疗。
【注意事项】
（1）工作人员需穿工作服及胶鞋，必要时戴口罩。工作前后均应洗手消毒，工作中不应吃食物、吸烟等。
（2）接种时应严格执行消毒及无菌操作。注射器、针头、镊子应高压或煮沸消毒。注射器最好采用一次性注射器或及时更换针头。注射部位皮肤用5％碘酊和75％乙醇消毒，被毛较长的剪毛后再消毒。
（3）疫苗使用前必须充分振荡，使其均匀混合后才能应用。免疫血清则不应振荡，沉淀不应吸取，并随吸（不含沉淀物）随注射。需经稀释后才能使用的疫苗，应按说明书的要求进行稀释。吸取疫苗时，先除去封口上的火漆或石蜡，用酒精棉球消毒瓶盖。瓶盖上固定一个消毒的针头专供吸取药液，吸液后不拔出，用酒精棉包好，以便多次吸取。给动物注射用过的针头不能吸液，以免污染疫苗。
（4）针筒排气溢出的药液应吸积于酒精棉球上，并将其收集于专用瓶内。用过的酒精棉球、碘酒棉球和吸入注射器内未用完的药液都放入专用瓶内，集中烧毁。已经打开瓶或稀释过的疫苗，必须当天用完，未用完的处理后销毁。
（5）免疫接种完毕，必须填写免疫档案。
【实践报告】
（1）记录免疫接种的方法步骤，写一份实践报告。
（2）根据当地的实际情况，制订一份宠物免疫接种计划。
实践3 宠物病料的采取与送检
【知识目标】
了解不同宠物疾病病料的种类和采取方法；了解宠物病料采取的目的和意义。
【技能目标】
学会采取、保存、包装和记录被检宠物病料。
【实践内容】
病料的采取；病料的保存；病料的包装和运送。
【材料准备】
1.材料 煮沸消毒器、外科刀、外科剪、镊子、刀片、试管、平皿、广口瓶、包装容器、注射器、采血针头、脱脂棉、载玻片、酒精灯、火柴等；新鲜动物尸体。
2.药品 保存液、来苏儿等。
3.实训场地 传染病实验室、宠物医院。
【方法步骤】
1.病料的采取
（1）剖检前检查。发现宠物急性死亡且天然孔出血时，先用显微镜检查其末梢血液涂片中是否有炭疽杆菌存在。如疑为炭疽，则不可随意剖检，只有在确定不是炭疽时方可进行剖检。
（2）采取时间。内脏病料的采取，必须在死亡后立即进行，夏天不迟于4h，冬天不迟于20 h。病料采取后，应立即送检。如不能立刻进行检验，应迅速冷藏。若需要采取血清测抗体，最好采发病初期和恢复期两个时期的血清。
（3）器械的消毒。刀、剪、镊子、注射器、针头等煮沸消毒30 min。玻璃制品、陶制品等器皿可用高压灭菌。软木塞、橡皮塞置于0.5％石炭酸水溶液中煮沸10 min。采取一种病料即使用一套器械和容器，不可混用。
（4）病料的采取。应根据不同的传染病，采取不同的脏器或内容物。如败血性传染病可采取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、胃、肠等；有神经症状的传染病采集脑、脊髓等。若无法判断是哪种传染病，可全面采取。检查血清抗体时，采取血液，凝固后析出血清，将血清装入灭菌小瓶送检。为了避免杂菌污染，病变检查应待病料采集完毕后再进行。各种组织及液体的病料采集方法如下。
①脓汁。用灭菌的注射器或吸管抽取或吸出脓肿深部的脓汁，置于灭菌试管中。若采取部位为开口的化脓灶或鼻腔，则用无菌棉签浸蘸脓汁后，放在灭菌的试管中。
②淋巴结及内脏。取淋巴结、肺、肝、脾及肾等有病变的部位，样品大小可酌情而定，淋巴结连带周围脂肪一起整体采取，样品分别置于灭菌容器或保鲜袋中。若为供病理组织切片的材料，应将典型病变部分及相连的健康组织一并切取，组织块的大小每边约2 cm。
③血液。
a.血清：以无菌操作吸取血液10 mL，置于灭菌试管中，待血液凝固析出血清后，吸出血清置于另一灭菌试管中。
b.全血：采取10 mL全血，立即注入盛有5％柠檬酸钠1 mL的灭菌试管中，搓转混合片刻后即可。
c.心血：心血通常在右心房处采集，先用烧红的刀片烙烫心肌表面，然后用灭菌的尖刃外科刀自烙烫处刺一小孔，再用灭菌的注射器吸出血液，装于灭菌试管中。
④乳汁。乳房先用消毒药水洗净，最初所挤的乳汁弃去，然后再采集5 mL乳汁于灭菌试管中。若仅供显微镜直接染色检查，则可在其中加入0.5％的福尔马林溶液。
⑤胆汁。先用烧红的刀片烙烫胆囊表面，再用灭菌的注射器刺入胆囊内吸取胆汁，盛于灭菌试管中。
⑥肠。用烧红的刀片将欲采取的肠表面烙烫后穿一小孔，将灭菌棉签插入肠内，采取肠管黏膜或其内容物；亦可用线扎紧一段肠管（约6 cm）两端，然后将两端切断，置于灭菌的器皿内。
⑦皮肤。取大小为10 cm×10 cm的皮肤块，保存于30％甘油缓冲溶液、10％饱和盐水溶液或10％福尔马林溶液中。
⑧流产胎儿和小宠物。将流产后的整个胎儿或小宠物尸体用不透水塑料袋包紧，装入木箱内，立即送往实验室。
⑨骨。需要完整的骨标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上食盐，然后包于浸过5％石炭酸水溶液或0.1％升汞溶液的纱布或麻布中，装在木箱内送往实验室。
⑩脑、脊髓。如采取脑、脊髓做病毒检查，可将脑、脊髓浸入50％甘油盐水溶液中，或将整个头部割下后用不透水塑料袋包紧，迅速冷藏送检。
⑪粪便。以清洁玻璃棒蘸新鲜粪便少许，置于小瓶内，或用棉拭子自直肠内取少许。尿用导尿管无菌采取尿液10～20 mL，立即送检。
⑫供显微镜检查用的脓汁、血液及黏液可用载玻片制成抹片，组织块可制成触片，然后在两块玻片之间靠近两端边缘处各垫一根火柴或牙签，以免抹片或触片上的病料互相接触。如玻片有多张，可按上述方法依次垫火柴或牙签重叠起来，最上面玻片上的涂（抹）面应朝下，最后用细线包扎。玻片上应注明编码，并另附说明。
2.病料的保存 采取病料后，如不能立即进行检验或需要运送到有关部门进行检验的，应立即冷冻保存或加入适当的保存剂保存。
（1）细菌检验材料的保存。将采取的脏器组织块保存于30％甘油缓冲溶液中，容器加塞封固。30％甘油缓冲溶液的配制方法：中性甘油30 mL、氯化钠0.5 g、碱性磷酸钠1.0 g，加蒸馏水至100 mL，混合后高压灭菌备用。
（2）病毒检验材料的保存。将采取的脏器组织块保存于50％甘油缓冲盐水溶液中，容器加塞封固。50％甘油缓冲盐水溶液的配制方法：氯化钠2.5 g、酸性磷酸钠0.46 g、碱性磷酸钠10.74 g，溶于100 mL中性蒸馏水中，加纯中性甘油150 mL，中性蒸馏水50 mL，混合分装后，高压灭菌备用。
（3）病料组织学检验材料的保存。将采取的脏器组织块放入10％福尔马林溶液或95％乙醇中固定；固定液的用量应为送检病料的10倍以上。如用10％福尔马林溶液固定，应在24 h后换新鲜溶液一次。严寒季节为防病料冻结，可将上述固定好的组织块取出，保存于甘油和10％福尔马林等量混合液中。
3.病料的包装和运送 病料送往检验室时，对病料容器一一标号，详加记录，并附上病料送检单。
（1）液体病料最好收集在灭菌细玻璃管中，管口用火焰封闭，注意勿使管内的病料受热。将封闭的玻璃管用废纸或棉花包装，装入较大的试管中，再装在木盒中运送。用棉签蘸取的鼻液及脓汁等物，可置于灭菌试管中，剪去多余的签柄，用蜡密封管口，再装入木盒内运送。
（2）盛装组织或脏器的玻璃容器，包装时力求细致而结实，最好用双重容器。将盛有病料的器皿用蜡封口后，置于内容器中，内容器中衬垫缓冲物（如棉花、碎纸等）。当气候温暖时，需加冰块，没有冰块时加冷水和等量的硫酸铵搅拌，使之迅速溶解，可使水温降至零下。再将内容器置于外容器中，外容器内应填充废纸、木屑、石灰粉等，再将外容器密封好。内外容器中所加缓冲物的量，以盛病料的容器万一破碎时能完全吸收其液体为度。外容器上需注明上下方向，写明“病理材料”“小心玻璃”的标记。
病料装入容器内至送到检验室的时间越快越好，且最好是专人送检。途中避免接触高热及日光，避免震动、冲撞，以免腐败或病原菌死亡。远途可航空托运，通知检验室及时提取。血清学和病理组织学检验材料，可妥善包装后邮寄。
【注意事项】
（1）采取微生物检验材料时，要严格按照无菌操作规定进行，并严防病原扩散。
（2）要有秩序地进行工作，注意消毒，严防自身感染及造成他人感染。
（3）正确保存和包装病料，正确填写送检单。
【实践报告】
结合病例情况，写出一份实践报告。
实践4 犬瘟热的实验室诊断
【知识目标】
了解犬瘟热的症状及流行病学特点；掌握犬瘟热的诊断要点。
【技能目标】
能独立自主地操作实验设备以开展犬瘟热的实验室检测。
【实践内容】
临床诊断要点；实验室诊断；CDV诊断试剂盒诊断法。
【材料准备】
显微镜、血细胞计数器、CDV诊断试剂盒。
【方法步骤】
1.临床诊断要点
（1）传染性强，病犬年龄多在3月龄～1岁，3～6月龄幼犬最易感。
（2）呈双相热型，体温40℃以上，结膜炎，眼与鼻有浆液性、黏性或脓性分泌物，有咳嗽、呼吸急促等支气管肺炎症状。
（3）发病后期出现神经症状。
（4）病程长的病犬足垫角化、增厚。
2.实验室诊断 病毒感染期白细胞数量减少。如有继发感染时，淋巴细胞减少，单核细胞和中性粒细胞数量增多，在外周循环血液中的白细胞特别是淋巴细胞中可见包含体。在疾病早期，抽取抗凝血离心后，用白细胞层做涂片，常规染色检查包含体有较高的价值。
3.CDV诊断试剂盒诊断法 用棉签采集犬眼、鼻分泌物，在专用的诊断稀释液中充分挤压洗涤，然后用小吸管将稀释后的病料滴加到诊断试剂盒的检测孔中，任其自然扩散，3～5 min后判定结果。若C、T两条线均呈红色，则判为阳性；若T线颜色较淡，则判为弱阳性或可疑；若C线呈红色而T线为无色，则判为阴性；若C、T两条线均无颜色，则应重做。应注意的是，用此法诊断有时可能出现假阳性，所以还应结合病犬临床表现及其他诊断方法，如中和试验、荧光抗体试验等进行确诊。
【实践报告】
根据实验室诊断内容及方法写出实践报告。
实践5 犬细小病毒病的实验室诊断
【知识目标】
了解犬细小病毒病的症状及流行病学特点；掌握犬细小病毒病的诊断要点。
【技能目标】
能用实验室常用的诊断技术诊断犬细小病毒病。
【实践内容】
HA.HI试验诊断法；CPV诊断试剂盒诊断法。
【材料准备】
恒温培养箱、微量振荡器、离心机、离心管、微量加样器、96孔V形反应板、注射器（1 mL、5 mL）、针头、试管、吸管、pH=7.2的磷酸盐缓冲液（PBS）、0.5％猪红细胞悬液、灭菌生理盐水、青霉素、链霉素、CPV标准阳性血清、CPV诊断试剂盒等。
【方法步骤】
1.HA.HI试验诊断法
（1）病毒的分离。取病犬粪便2g加入4倍量PBS，摇匀后以3000 r/min离心20 min，取上层液作为待检抗原备用。
（2）犬细小病毒血凝试验及血凝抑制试验。本法检查犬细小病毒有两种情况，一是检查病原，一是检查抗体。检查病原时，取分离到的疑似病料进行血凝试验检测其血凝性，如凝集再用CP标准阳性血清进行血凝抑制试验可确检。检查抗体时，需采取疑似犬细小病毒急性期和康复后期的双份血清，即间隔10 d的双份血清，用血凝抑制试验，证实抗体效价增高即可确检。
2.CPV诊断试剂盒诊断法 用棉签采集犬排泄物，在专用的诊断稀释液中充分挤压洗涤，然后用小吸管将稀释后的病料滴加到诊断试剂盒的检测孔中任其自然扩散，3～5 min后若C、T两条线均呈红色，则判为阳性；若T线颜色较淡，则判为弱阳性或可疑；若C线呈红色而T线为无色，则判为阴性；若C、T两条线均无颜色，则应重做。应注意的是，用此法诊断有时可能出现假阳性，故还应结合其他诊断方法进行确诊。
【实践报告】
根据实验室诊断内容及方法写出实践报告。
实践6 犬、猫常见吸虫的形态观察
【知识目标】
了解犬、猫常见吸虫形态构造；了解犬、猫吸虫中间宿主螺的一般形态。
【技能目标】
能结合剖检正确识别寄生犬、猫体内吸虫，说出其种名；能在显微镜下正确描述犬、猫常见吸虫虫体的构造，说出其形态特点；能正确识别犬、猫常见吸虫的中间宿主。
【实践内容】
观察宠物犬、猫常见吸虫的形态构造；观察螺的一般形态。
【材料准备】
1.挂图 吸虫构造模式图、华支睾吸虫、后睾吸虫、并殖吸虫；中间宿主形态图。
2.标本
（1）上述吸虫的染色标本和浸渍标本。
（2）吸虫的中间宿主，如扁卷螺、蜗牛、钉螺等。
（3）严重感染吸虫的动物内脏。
3.仪器及器材 多媒体投影仪、显微投影仪、实体显微镜、放大镜、组织针、尺、毛笔、镊子、培养皿等。
【方法步骤】
在生物显微镜或实体显微镜下，观察代表虫种的染色标本。主要观察口、腹吸盘的位置和大小；口、咽、食道和肠管的形态；睾丸数目、形状和位置；雄茎囊的构造和位置；卵巢、卵膜、卵黄腺和子宫的形状与位置；生殖孔的位置等。
【实践报告】
（1）绘出虫体形态构造图，标出各器官名称。
（2）将所观察的吸虫形态构造特征填表记录。(https://www.daowen.com)
【参考资料】
一、吸虫的鉴别点
（1）形状和大小。
（2）表皮光滑或有结节、小刺。
（3）口吸盘和腹吸盘的位置和大小。
（4）肠管的形状和构造。
（5）雌雄同体或异体。
（6）生殖孔的位置。
（7）睾丸的数目、形状和位置。
（8）卵巢和子宫的形状和位置。
二、犬、猫常见吸虫形态结构
1.华支睾吸虫 成虫体形狭长，背腹扁平，前端稍窄，后端钝圆，呈叶状，半透明，体表无棘。虫体大小一般为（10～25）mm×（3～5）mm，口吸盘略大于腹吸盘，前者位于体前端，后者位于虫体前1/5处。消化道简单，口位于口吸盘的中央，咽呈球形，食道短，其后为肠支。排泄囊为略带弯曲的长袋，前端到达受精囊水平处，并向前端发出左右两支集合管，排泄孔开口于虫体末端。雄性生殖器官有两个睾丸。无雄茎、雄茎囊和前列腺。雌性生殖器官有卵巢一个。卵膜之前为子宫，盘绕向前开口于生殖腔。受精囊在睾丸与卵巢之间，呈椭圆形，与输卵管相通。劳氏管位于受精囊旁，也与输卵管相通，为短管，开口于虫体背面。卵黄腺呈滤泡状，分布于虫体的两侧，两条卵黄腺管汇合后，与输卵管相通。
2.猫后睾吸虫 虫体大小（7～12）mm×（2～3）mm，体表光滑，颇似华支睾吸虫，但略小。睾丸呈裂状分叶，前后斜列于虫体后1/4处。睾丸之前是卵巢及较发达的受精囊。子宫位于肠支之内，卵黄腺位于肠支之外，均分布在虫体中1/3处。排泄管在睾丸之间，呈S状弯曲。
3.卫氏并殖吸虫 成虫椭圆形，虫体肥厚，背侧稍隆起，腹面扁平。活体红褐色，体表被有细小皮棘。口、腹吸盘大小相似，口吸盘位于虫体前端，腹吸盘约在虫体腹面中部。消化器官包括口、咽、食道及两支弯曲的肠支，两支弯曲肠支延伸至虫体后部。卵巢分5～6个叶，形如指状，与子宫并列于腹吸盘之后。两个睾丸有4～6个分支，并列于卵巢和子宫之后，虫体后1/3处。
实践7 宠物常见绦虫的形态观察
【知识目标】
了解犬、猫常见绦虫形态构造；了解犬、猫绦虫卵的形态特点；认识犬、猫常见绦虫，掌握其形态构造特征。
【技能目标】
能结合剖检正确识别寄生于犬、猫体内的绦虫，说出其种名；通过显微镜观察，能正确描述犬、猫常见绦虫的构造，说出其形态特点；能正确识别犬、猫常见绦虫的幼虫。
【实践内容】
观察宠物犬、猫常见绦虫的形态构造；认识常见绦虫幼虫的一般形态。
【材料准备】
1.挂图 犬复孔绦虫、细粒棘球绦虫、泡状带绦虫、豆状带绦虫的形态结构图。
2.标本 上述绦虫成虫的浸渍标本及其头节、成节、孕节的染色标本。
3.仪器及器材 多媒体投影仪、显微投影仪、显微镜、放大镜、组织针、毛笔、镊子、培养皿、尺等。
【方法步骤】
（1）尺测量虫体全长及最宽处，测量成熟节片的长度和宽度。
（2）在显微镜下观察代表虫种的染色标本。主要观察头节的构造：成熟节片的睾丸位置、卵巢形状、卵黄腺及梅氏腺的位置、生殖孔的开口：孕卵节片的子宫形状和位置等。
【实践报告】
（1）绘出虫体头节及成熟节片的形态构造图，标出各部名称。
（2）将所观察绦虫的形态构造特征填入实验报告单。
【参考资料】
一、犬复孔绦虫的形态结构
犬复孔绦虫的活体为浅红色，固定后为乳白色，长10～50 cm，宽约3 cm，约有200个节片。头节近似菱形，具有4个吸盘和1个可伸缩的顶突，其上有4～5圈小钩。体节呈黄瓜籽状，故又称为瓜籽绦虫。成熟节片具有两组雌、雄生殖器官，呈两侧对称排列。2个生殖孔对称地分列于节片两侧缘的近中部。成节有睾丸100～200个，各经输出管、输精管通入左右两个贮精囊，开口于生殖孔。卵巢和卵黄腺各2个，位于节片两侧，形似葡萄状。孕节子宫呈网状，后分化为若干个贮卵囊，每个贮卵囊内含2～40个虫卵。
二、泡状带绦虫的形态结构
泡状带绦虫是较大型的虫体，呈乳白色或微带黄色，长75～500 cm，由250～300个节片组成。头节有吸盘、顶突和26～46个小钩。成熟节片内有一套生殖器官，睾丸600～700个，子宫有5～16对大侧支，大侧支再分出许多小支，生殖孔在体缘不规则交替开口，孕节全部被虫卵充满。
虫卵近似椭圆形，内含六钩蚴，大小为（36～39）μm×（31～35）μm。
幼虫为细颈囊尾蚴，寄生于猪、羊等多种动物的大网膜、肠系膜、肝浆膜等部位。
囊体乳白色，囊泡状，内含透明液体，俗称“水铃铛”，大小如鸡蛋或更大，直径约为8 cm，囊壁薄，上有一个乳白色具有长颈的头节。在肝、肺等脏器中的囊体，有因宿主组织反应产生的厚膜包裹，故不透明。
三、细粒棘球绦虫的形态结构
细粒棘球绦虫的虫体很小，由1个头节和3～4个节片组成，全长不超过7 mm，头节略呈梨形，具有顶突和4个吸盘；顶突上有两圈大小相间的小钩，共36～40个，呈放射状排列。成熟节片内有一套生殖器官，孕节长度超过虫体全长的一半，睾丸45～65个，均匀地散布在生殖孔水平线前后。子宫呈不规则的分支和侧囊，含虫卵200～800个。
幼虫为单房型棘球蚴，多寄生于羊、猪、牛等动物的肝脏、肺脏表面。
囊体为圆形囊状结构，大小因寄生的时间、部位及宿主的不同而异，直径多为5～10 mm，小的仅有黄豆大，最大可达50 mm。
实践8 犬、猫常见线虫的形态观察
【知识目标】
认识犬、猫常见线虫，了解其形态构造特征。
【技能目标】
能结合剖检，正确识别寄生于犬、猫体内的线虫；能在显微镜下正确描述常见线虫的虫体构造，说出其形态特点。
【实践内容】
观察犬、猫常见吸虫的形态构造；学习用改良Knott法检测微丝蚴。
【材料准备】
1.形态构造图 线虫构造模式图，蛔虫、肌旋毛虫、钩虫、犬恶丝虫、毛首线虫、光丝线虫、膨结线虫、吸吮线虫形态图。
2.标本
（1）上述线虫的透明标本和浸渍标本。
（2）肌旋毛虫标本片。
（3）严重感染线虫的动物内脏。
3.试剂、仪器及器材 多媒体投影仪、显微投影仪、实体显微镜、放大镜、组织针、毛笔、镊子、培养皿、尺、蜡盘、解剖针、大头针、离心管、离心机、2％甲醛、犬恶丝虫快速诊断试剂盒等。
【方法步骤】
（1）教师用投影仪带领学生共同观察上述线虫的图片，指出各种线虫的形态构造特点。
（2）教师示范蛔虫的解剖，利用蛔虫的解剖标本带领学生共同观察线虫的一般解剖构造。
（3）学生分组进行线虫形态观察。取蛔虫及其他线虫的浸渍标本，置于培养皿中观察其一般形态，用尺测量大小，并在显微镜或放大镜下进行详细观察。取透明标本和浸渍标本，在显微镜下观察上述线虫的口、齿及虫体尾端的结构，并加以鉴别。
（4）取肌旋毛虫标本片，在显微镜下观察其包囊。
（5）取成年疑似本病犬，于后肢小隐静脉采全血1 mL于离心管，加2％甲醛9 mL，混合后以100～1000 r/min离心5～8 min。弃去上层液，取一滴沉渣和一滴0.1％亚甲蓝溶液混合，在显微镜下检验微丝蚴。上述方法即为改良Knott法，同时与犬恶丝虫快速诊断试剂盒检测结果比较。
【实践报告】
（1）绘出雌、雄犬蛔虫解剖简图，并标出各器官的名称。
（2）写出肌旋毛虫的形态特征，并绘出简图。
（3）写出改良Knott法检测微丝蚴的方法步骤。
实践9 犬、猫常见蠕虫卵的形态观察
【知识目标】
掌握犬、猫常见吸虫卵的形态特征；掌握犬、猫常见绦虫卵的形态特征；掌握犬、猫常见线虫卵的形态特征。
【技能目标】
能结合粪便检查正确识别犬、猫体内蠕虫卵，为寄生虫病诊断提供重要的依据；能在显微镜下正确描述犬、猫常见蛹虫卵的形态特点。
【实践内容】
犬、猫主要吸虫卵的形态观察；犬、猫主要绦虫卵的形态观察；犬、猫主要线虫卵的形态观察。
【材料准备】
1.挂图 宠物常见蠕虫卵的形态图、粪便中易与虫卵混淆的物质图。
2.标本 宠物常见虫卵的标本片。
3.仪器及器材 示教显微镜、显微投影仪。
【方法步骤】
（1）教师指出蠕虫卵的鉴别要点。
（2）观察华支辜吸虫卵、并殖吸虫卵、犬复孔绦虫卵、犬弓首蛔虫卵等虫卵的形态，介绍虫卵形态的主要特征。
（3）分组观察犬、猫常见蠕虫卵（可扫下方二维码查看）。
【实践报告】
绘出吸虫、绦虫和线虫代表性虫卵各一种，并说出其形态特点。
实践10 犬、猫常见蜱螨及昆虫的形态观察
【知识目标】
掌握犬、猫疥螨、耳痒螨、蚤和虱的主要形态特点。
【技能目标】
能够准确识别犬、猫疥螨、耳痒螨、蚤和虱。
【实践内容】
犬、猫常见螨、蚤和虱的形态观察。
【材料准备】
1.挂图 疥螨、痒螨、蠕形螨和蚤、虱的形态构造图。
2.标本 上述虫体的浸渍标本和制片标本。
3.器材 显微投影仪、多媒体投影仪、平皿、放大镜、显微镜。
【方法步骤】
1.硬蜱观察 取硬蜱浸渍标本置于平皿，在放大镜下观察其形态构造。然后在显微镜下观察，注意假头的长短、假头基的形状，眼的有无，盾板形状和大小，有无花斑，须肢的长短和形状等。
2.螨类的观察 取痒螨、疥螨、蜗形螨标本，在显微镜下观察其大小、形状，口器形状，肢的长短，肢端吸盘的有无，交合吸盘的有无等。
3.虱的观察 取虱标本，观察外部一般形态。
4.蚤的观察 取蚤的浸渍标本，观察其外部一般形态。
【实践报告】
（1）写出犬疥螨的形态特征。
（2）写出犬虱的形态特征。
【参考资料】
一、犬疥螨的形态
疥螨呈圆形，微黄白色，背面隆起，腹面扁平。雌螨体长0.30～0.40 mm，雄螨体长0.19～0.23 mm。躯体可分为两部分（无明显界限）：前为背胸部，有第一对足和第二对足；后为背腹部，有第三对足和第四对足，体背面有细横纹、锥突、圆锥形鳞片和刚毛。口器呈蹄铁形，咀嚼式，假头后方有一对短粗的垂直刚毛，背胸上有一块长方形的胸甲。肛门位于背腹部后端的边缘上。躯体腹面有4对短粗的足，第三、四对足不突出体缘。雄螨在第一、二、四对足上，雌螨在第一、二对足上各有一个盂状吸盘，长在一根中等长短的盘柄的末端。在雄螨的第三对足和雌螨的第三、四对足的末端，各有一根长刚毛。
二、犬蠕形螨的形态
犬蠕形螨细长，半透明乳白色。雄螨体长0.22～0.25 mm，宽约0.04 mm；雌螨体长0.25～0.3 mm，宽0.14 mm。虫体分为前、中、后3部分，口器位于前部，呈蹄铁状突出，其中含1对3节组成的须肢，1对剩状肢和1个口下板；中部有4对很短的足；后部细长，上有横纹密布。雄虫的生殖孔开口于背面，雌虫的生殖孔开口于腹面。
三、犬耳痒螨的形态
犬耳痒螨呈椭圆形，雄虫体长0.35～0.38 mm，雌虫体长0.46～0.53 mm，口器短，圆锥形，刺吸式，4对肢较长。雄螨每对肢末端和雌螨第一、二对肢末端均有带柄的吸盘，柄短，不分节。雌螨第四对肢不发达，不突出于体缘。雄螨尾突不发达，上有长毛。
四、蚤的形态
蚤目昆虫一般称为跳蚤。栉首蚤的个体大小变化较大，雌蚤长，有时可超过2.5 mm，雄蚤则不足1.0 mm，两性之间大小可相差一倍。雌蚤吸血后腹部不膨大，跳跃能力极强。蚤为深褐色，体表有较厚的几丁质外皮，刺吸式口器。头小，与胸紧密相连。触角短而粗，分3节，平卧于触角沟内。胸部小，有能活动的3个胸节。足大而粗，基节甚大，有5个跗节，上有粗爪。腹部由10节组成，通常只见前7节，后3节变为外生殖器。卵呈白色，小球形。
五、虱的形态
犬棘颚虱属于血虱亚目颚虱科领虱属，呈淡黄色，刺吸式口，头圆锥形，较胸部狭窄，腹大于胸，触角短，通常由5节组成，眼退化，3对足较粗短，其末端有一强大的爪，腹部有11节，第一、二节多消失。雄虱长1.75 mm，末端钝圆，雌虱长2.02 mm，末端分叉。虫体以血液、淋巴液为食。
犬啮毛虱属于食毛亚目毛虱科毛虱属，呈淡黄褐色，具褐色斑纹；咀嚼式口器；头扁圆，宽于胸部；腹大于胸，腹部明显由8～9节组成。触角一对，3对足较细小，足末端有一爪。雄虱长1.74 mm，雌虱长1.92 mm。不吸血，以毛、皮屑等为食。
寄生于猫的虱主要是近状猫毛虱，属于毛虱科毛虱属，虫体呈淡黄色，腹部白色，并具明显的黄褐色带纹，咀嚼式口器，头呈五角形，较犬啮毛虱稍尖，胸较宽，有触角1对，足3对。以皮肤碎屑为食。
实践11 螨病的实验室诊断技术
【知识目标】
认识犬疥螨的形态，掌握其诊断方法；认识犬蠕形螨的形态，掌握其诊断方法。
【技能目标】
会对犬疥螨进行实验室诊断；会对犬蠕形螨进行实验室诊断。
【实践内容】
犬疥螨的实验室常用诊断操作；犬蠕形螨的实验室常用诊断操作。
【材料准备】
1.器材 显微镜、实体显微镜、手持放大镜、平皿、试管、试管夹、手术刀、镊子、载玻片、盖玻片、温度计、带胶乳头移液管、离心机、污物缸、纱布。
2.药品 5％氢氧化钠溶液，60％硫代硫酸钠溶液，石蜡油或煤油。
3.病料 患蠕形螨、疥螨的病犬或含螨病料。
【方法步骤】
1.犬疥螨的检查
（1）病料的收集。应在患病皮肤与健康皮肤的交界处进行刮取。先将患部剪毛，用凸刃外科刀，使刀刃与皮肤表面垂直，尽力刮取皮屑，一直刮到带有血迹为止，甚至有点轻微出血最好。此点对检查寄生于皮内的疥螨尤为重要。切不可轻轻地刮取一些皮肤污垢供检查，这样往往检不到虫体而发生误诊。被刮部的皮肤用碘酊消毒，并将刮取物盛于平皿或试管内，以供镜检或制备标本。
（2）检查方法。可用显微镜直接检查法、螨虫浓集法、温水检查法和培养皿内加温法。
显微镜直接检查法：将刮下的皮屑置于载玻片上，滴加石蜡油，加上盖玻片，摊压盖玻片使病料散开，置显微镜下观察。
螨虫浓集法：为了在较多的病料中检出其中较少的虫体，可采用浓集法提高检出率。即取较多的病料置于试管内，加入10％氢氧化钠溶液，浸泡过夜（若急需检查，可在酒精灯上加热煮沸数分钟），使皮屑溶解，虫体自皮屑中分离出来，而后待其自然沉淀（或以2000 r/min离心沉淀5 min），虫体即沉于管底。弃去上层液，吸取沉渣镜检。也可采用上述方法的病料加热溶解离心后，倒去上层液，再加入60％硫代硫酸钠溶液，充分混匀后再离心2～3 min，螨体即漂浮于液面，用金属圈蘸取表面薄膜，抖落于载玻片上，加盖玻片镜检。
温水检查法：即用幼虫分离法装置，将刮取物放在盛有40℃左右温水的漏斗上的铜筛中，经0.5～1 h。由于温热作用，螨从痂皮中爬出集成小团沉于管底，取沉淀物进行检查。也可将病料浸入40～45℃的温水里，置恒温箱中，1～2 h后，将其倾在表面玻璃上，解剖镜下检查。活螨在温热的作用下由皮屑内爬出，集结成团，沉于水底部。
培养皿内加温法：将刮取的干病料放于培养皿内，加盖。培养皿用40～50℃的温水杯加温10～15 min后，将皿翻转，则虫体与少量皮屑黏附于皿底，大量皮屑落于皿盖上，取皿底检查。皿盖可继续加温，再过15 min，仍可有虫体黏附于皿底部。以上操作可反复进行。此法可在镜下收集到与皮屑分离的虫体，供制玻片标本用。
2.犬蠕形螨的检查
（1）病料采取。蠕形螨寄生在毛囊内，检查时先在动物四肢的外侧和腹部两侧、背部、眼眶四周、颊部和鼻部的皮肤上按摩是否有砂粒样或黄豆大的结节。如有，则用力挤压或用小刀切开挤压，看到有脓性分泌物或淡黄色干酪样团块时，则可将其挑在载玻片上。
（2）检查方法。在有病料的载玻片上滴加生理盐水1～2滴，均匀涂成薄片，上覆盖玻片，在显微镜下进行观察。
【实践报告】
写出犬疥螨病的实验室诊断操作过程。
实践12 宠物血液原虫检查
【知识目标】
准确识别宠物常见血液原虫的形态结构。
【技能目标】
能正确利用实验室检查操作技术诊断血液原虫。
【实践内容】
液涂片的制备；血液原虫的检查。
【材料准备】
1.仪器 显微镜、标本瓶、盆（或桶、平皿）、天平（100 g）、离心机、胶头滴管、针头、载玻片、盖玻片、试管、记号笔等。
2.试剂 姬姆萨染液、瑞氏染液等试剂。
【方法步骤】
一般用消毒的针头自耳静脉或颈静脉采血，此法适用于检查寄生于血液中的伊氏锥虫、住白细胞虫和梨形虫等。
1.鲜血压滴标本检查法 将采出的血液滴于载玻片上，加等量生理盐水，混合均匀后加盖玻片，立即置显微镜下检查。冬季室温过低，应先用低倍镜检查，发现有运动的可疑虫体时，换成高倍镜检查。为保持虫体的活力，玻片在酒精灯上或炉旁略加温。
2.涂片染色标本检查法 采血制作血涂片。固定后按照姬姆萨和瑞氏染色液试剂盒进行操作染色。
3.离心集虫体检查法 当血液中虫体较少时，可先进行离心集虫，再进行制片检查。操作方法是在离心管中加2％的柠檬酸钠生理盐水3～4 mL，再加病犬血液6～7 mL，混匀后，以500 r/min离心5 min，使其中大部分红细胞沉降。然后将含有少量红细胞、白细胞和虫体的上层血浆，用吸管移入另一个离心管中，并在血浆中补加一些生理盐水，以2500 r/min离心10 min，取其沉淀物制成抹片，按上述染色法染色检查。此法适用于伊氏锥虫病和梨形虫病的检查。
【实践报告】
描述犬巴贝斯虫病检查的操作过程及所检出虫体的形态。
实践13 犬、猫粪便镜检技术
【知识目标】
了解宠物粪便中常见寄生虫及其虫卵的种类、形态及危害。
【技能目标】
学会用粪便检查的方法对宠物寄生虫病进行诊断。
【实践内容】
粪便的采集和保存；粪便中常见寄生虫的检查；粪便中虫卵的集卵检查；粪便中常见寄生虫卵的计数。
【材料准备】
1.仪器和用具 生物显微镜、橡胶或塑料手套、塑料袋、盆（或桶）、平皿、分离针、毛笔、天平、粪筛、60目铜网、玻璃棒、铁丝环、烧杯（或塑料杯）、100 mL烧杯、离心管、漏斗、离心机、载玻片、盖玻片、带胶乳头的移液管、污物桶、纱布等。
2.试剂 饱和盐水、0.1 mol/L（或0.4％）氢氧化钠溶液。
【方法步骤】
1.粪便的采集
（1）粪便采集的要求。被检粪便应该是新鲜且未被污染的。陈旧粪便往往干燥、腐败、被污染，其中的虫卵已发育或变形，干扰正常的诊断。
（2）粪便采集的方法。小动物使用导便管采集粪便。自然排出的粪便，要采取粪堆上部未被污染的部分。采取的粪便应装入清洁的容器内。为防止相互污染，采集用品和容器最好一次性使用，如多次使用则每次都要清洗。采取的粪便应尽快检查。
（3）粪样的保存。如粪样不能立即检查，应放在冷暗处或冰箱冷藏箱中保存，以抑制虫卵和幼虫的发育，并防止粪便发酵，当地不能检查需送出或保存时间较长时，可将粪样浸入加温至50～60℃、5％～10％的福尔马林中，使其中的虫卵失去活力，但仍保持原有形态，并防止虫卵繁殖。
2.粪便中寄生虫的检查 寄生在小肠中的绦虫节片和消化道中的线虫常会随着粪便排出体外，宠物驱虫后，消化道中的虫体也会随粪便排出，因此可仔细检查粪便，发现虫体。
（1）大型虫体的检查。粪便中较大型寄生虫如绦虫的孕卵节片和蛔虫、钩虫等虫体，易于发现。挑出粪便中的虫体，鉴定其种类。
（2）较小虫体的检查。较小的虫体不易被发现，先将粪便收集于盆（或桶）内，加入5～10倍清水，搅拌均匀后静置，自然沉淀。15～20 min后将上层液倾去，重新加入清水，搅拌、沉淀，倾去上层液，反复操作，直到上层液清澈为止。此法为反复水洗沉淀法。最后将上层液倾去，取沉渣置于平皿中，先后在白色背景和黑色背景上，以肉眼或借助放大镜寻找虫体。发现虫体时用分离针或毛笔将虫体挑出，鉴定其种类。
3.粪便中虫卵的检查
（1）直接镜检法。其操作方法如下。
①取1～2滴清水，滴在载玻片上。
②用牙签或火柴棍取少量粪便（约火柴头大小）与载玻片上的清水混匀。
③剔除较粗的粪渣。
④将粪液涂成薄膜，薄膜的厚度以透过涂片隐约可见书上的字迹为宜。
⑤盖上盖玻片，置于低倍镜下检查。
注意事项如下。
①本法的检出率低，每个样品必须检查3～5片，以便提高检出率。
②镜检需仔细观察，先用低倍镜观察样片中所有部分；发现疑似虫卵时，再用高倍镜检查。
③因一般虫卵（尤其是线虫卵）颜色较淡，镜检时视野宜稍暗些。
（2）漂浮法。漂浮法是利用密度比虫卵大的溶液作为漂浮液，使粪便中密度较小的虫卵能够浮于液体表面，便于进行集中检查。漂浮法对大多数较小的虫卵，如某些线虫卵、绦虫卵和球虫卵囊等有很高的检出率，但对吸虫卵的检出效果较差。现最常用的漂浮法是试管浮聚法。
最常用的漂浮液是饱和食盐水。其配制方法为：将食盐加入沸水中，直至不再溶解生成沉淀为止，配制成饱和食盐水溶液（38％，1000 mL水中约加入食盐380 g），冷却备用。
漂浮法的操作方法如下。
①取5～10 g粪样，放于烧杯（或塑料杯）中。
②加饱和食盐水100 mL。
③用玻璃棒搅匀，用60目铜筛过滤到另一烧杯（或塑料杯）中。
④将滤液倒入试管或青霉素瓶，使液面接近管口。
⑤静置约30 min。
⑥用直径5～10 mm的铁丝圈与液面轻轻接触，以蘸取表面液膜，抖落于载玻片上，如此多次蘸取不同部位的液膜，加盖玻片检查。
注意事项如下。
①漂浮时间。粪样在饱和盐水中漂浮时间以30 min左右为宜。少于10 min漂浮不完全；超过1h易造成虫卵变形、破裂，难以识别。
②漂浮液的保存。漂浮液必须饱和。应将漂浮液保存于不低于13℃的环境中，才能保持较高的密度，否则易因吸收空气中的水分而降低密度。
③漂浮液的选择。除饱和盐水外，饱和蔗糖溶液（1000 mL水中溶解1280 g蔗糖）也适用于多种虫卵的漂浮。其他漂浮液，如饱和硫酸锌溶液（1000 mL水中溶解920 g硫酸锌），也具有较高的漂浮力，可视情况选用。
④静置滤液的容器选择。选用口径相对较小的器皿，如经济实惠的青霉素瓶。
⑤其他漂浮法检查多例粪便时，如用铁丝圈蘸取液面，检查完一例再蘸取另一例时，需将铁丝圈在酒精灯上烧过后再用，避免相互污染而影响检查结果。如用载玻片或盖玻片蘸取虫卵，则玻片一定要干净无油腻，否则难以蘸取。
（3）沉淀法。沉淀法是利用比水重的虫卵可以沉于水底这一原理，进行集卵检查的一种方法。一般用于检查吸虫卵。为了加速虫卵在水中的沉降速度，通常采用离心机沉淀法。
沉淀法的操作方法如下。
①取5g粪便置于烧杯或塑料杯中。
②加清水100 mL。
③用玻璃棒搅匀，用60目铜筛过滤，将滤液倒入离心管中。
④在电动离心机中以20000～2500 r/min离心1～2 min。
⑤取出离心管，倾去上层液，保留沉渣，再加水搅拌，离心沉淀。
⑥如此离心2～3次，直到离心管中上层液澄清为止，最后倾去上层液。
⑦用吸管吸取一滴沉淀物，滴于载玻片上，加盖玻片镜检。
注意事项如下。
①此法检测的粪量少，一次粪检最好多看几张片子，以提高检出率。
②离心机沉淀法与漂浮法的适用范围相互补充，可结合起来应用于寄生虫病的确诊，如可先用漂浮法将虫卵和更轻的物质漂起来，再用离心机沉淀，将虫卵沉下去；或者先用沉淀法使虫卵及比虫卵重的物质沉下去，再用漂浮法使虫卵浮起来，以获得更高的检出率。
【实践报告】
1.以小组为单位，用不同的集卵法对不同的粪样进行检查，然后报告检查结果。
2.绘制所发现虫卵的形态图。
