4.3.2 常用染色溶液
1.番红染液
(1)番红水溶液:称取番红0.5 g或1g,溶于100 mL蒸馏水中,配制成0.5%或1%的溶液,过滤后即可。
(2)番红醇溶液:称取番红1g或0.5 g,溶于100 mL 50%乙醇中,过滤后即可。
番红为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。番红能与固绿、苯胺蓝等做双重染色,与橘红G、结晶紫做三重染色。
2.固绿染液
称取固绿0.1 g,溶于100 mL 95%乙醇中,过滤后使用。
固绿为酸性染料,能将细胞质、纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好地掌握着色时间。一般现配现用效果好。
3.碘-碘化钾(I2-KI)溶液和稀碘液
先取3g碘化钾,溶于100 mL蒸馏水中,再加入1g碘,溶解后即成为碘-碘化钾溶液。它能将蛋白质染成黄色。如用于淀粉的鉴定,还可以稀释成稀碘液,即将碘-碘化钾溶液稀释3~5倍。如果用于观察淀粉粒上的轮纹,需稀释100倍以上,观察结果更加清晰。
4.苏木精染液
常用的苏木精染液配方有以下3种。
(1)爱氏(Ehrlich)苏木精:取苏木精1g、无水或95%乙醇50 mL、蒸馏水50 mL、甘油50 mL、冰醋酸5 mL、硫酸铝钾(明矾)3~5 g,将1g苏木精溶解于乙醇中,然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸,最后加入研碎的明矾,甘油可以微热,注意边加边搅拌,直至瓶底出现铁矾结晶为止。混合后的溶液呈淡红色,放入棕色广口瓶中,用纱布或棉花塞封口,自然氧化1~2个月,可经常振荡溶液以加速苏木精的氧化成熟,至溶液颜色为深红色时即可过滤成原液备用。若加0.2 g碘酸钠即可立即成熟,成熟后的原液必须密封并置于低温暗处,可长期保存。使用时以原液1份加入50%乙醇与冰醋酸等量混合液1份或2份,染色时间通常是15~40 min。爱氏苏木精染液可以重复使用,可用另一个容器将换下的染液装好备用。
(2)苏木精水溶液:取0.5 g苏木精,溶于100 mL煮沸的蒸馏水中,静置1d后即可使用。
(3)铁矾苏木精:①甲液(媒染剂):铁明矾(硫酸铁铵)4 g、蒸馏水100 mL、冰醋酸1 mL、硫酸0.12 mL。甲液必须保持新鲜,最好临用配制。②乙液(染色剂):取苏木精0.5~1 g、95%乙醇10 mL、蒸馏水90 mL,混合。乙液配好后,瓶口用纱布包扎静置,以防尘通气,使其慢慢氧化,1~2个月溶液氧化成熟变成深红色后,可再加入蒸馏水然后密封,置于冰箱中可长期保存。如急用,可加入3~5 mL过氧化氢溶液促其氧化成熟,但如果红色消失则已失效。染色时,切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适合程度。铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下绝不能混合。
5.醋酸洋红液
将100 mL45%的醋酸水溶液放在200 mL锥形瓶中,煮沸30 s,移去火苗,然后慢慢分多次加入1g洋红粉末(注意不能一下倾入,以防溅沸)。全部投入后,再煮1~2 min,并悬一枚生锈的小铁钉于染液中,过1 min后取出,或加入氢氧化铁的50%醋酸饱和溶液1~2滴(不能多加,以免产生沉淀),使染色剂略含铁质,以增进染色性能。静置12 h后,过滤于棕色瓶中备用(避免阳光直射)。
6.铁明矾媒染液
称取4g铁明矾,溶于100 mL蒸馏水中,过滤后备用。
7.间苯三酚染液
称取5g间苯三酚,加入100 mL 95%乙醇中溶解。注意溶液呈黄褐色即失效,用来染木质化的细胞壁,在酸性条件下,可使木质化成分变成红色。
8.苏丹Ⅲ(或Ⅳ)染液
有两种配法:①称取苏丹Ⅲ(或Ⅳ)0.1 g,溶于20 mL 95%乙醇中即可;②先将0.1 g苏丹Ⅲ(或Ⅳ)溶解在50 mL丙酮中,再加入70%乙醇50 mL,即可使用。储存于棕色瓶中,可保存2个月。
9.龙胆紫染液
取0.2 g龙胆紫,溶于100 mL蒸馏水中。龙胆紫是一种碱性染料,可染细胞核、染色质、纺锤丝、线粒体等。现常用结晶紫代替。
10.中性红(neutral red)溶液
用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。配方:中性红0.1 g加蒸馏水100 mL,使用时再稀释10倍左右。
11.曙红(伊红,eosin Y)乙醇溶液
常与苏木精对染,能将细胞质染成浅红色,起衬染作用。配方:曙红0.25 g加95%乙醇100 mL。也常用于95%乙醇脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。
12.改良苯酚品红染液
本溶液为核染色剂,配制步骤:先配成3种原液,再配成染液。
原液A:3 g碱性品红溶于100 mL 70%乙醇中。
原液B:取原液A10mL,加入90 mL5%苯酚水溶液中。
原液C:取原液B 55 mL,加入6 mL冰醋酸和6 mL福尔马林(38%甲醛溶液)。
原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用。
染液:取原液C 10~20 mL,加45%冰醋酸80~90 mL,再加山梨醇1~1.8 g,配成10%~20%的苯酚品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染液的作用。假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。