4.3.3 常用固定液和离析液

4.3.3 常用固定液和离析液

1.FAA固定液(又称万能固定液)

福尔马林5 mL、冰醋酸5 mL、70%乙醇90 mL,还可加5 mL甘油。幼嫩材料用50%乙醇代替70%乙醇。

2.FPA固定液

甲醛5 mL、丙酸5 mL、70%乙醇90 mL,用于固定一般的植物材料,通常固定24 h,效果比FAA固定液好,并可长期保存。

3.卡诺固定液

配方一:无水乙醇3份加冰醋酸1份。

配方二:无水乙醇6份、冰醋酸1份加氯仿3份。

卡诺固定液是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液,材料固定后,用95%乙醇和85%乙醇浸洗,清洗2~3次,也可转入70%乙醇中保存备用。

4.铬酸-醋酸固定液

根据固定对象的不同,可分强、中、弱3种不同的配方。

(1)弱液配方:10%铬酸2.5 mL、10%醋酸5.0 mL、蒸馏水92.5 mL。

(2)中液配方:10%铬酸7 mL、10%醋酸10 mL、蒸馏水83 mL。

(3)强液配方:10%铬酸10 mL、10%醋酸30 mL、蒸馏水60 mL。

弱液用于固定较柔嫩的材料,如藻类、真菌类、苔藓植物和蕨类的原叶体等,固定时间较短,一般为数小时,长时可固定12~24 h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短为几分钟到1h。中液用于固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等,固定时间为12~24 h或更长。强液适用于固定木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等,固定时间为12~24 h或更长。为了易于渗透,可在中液和强液中另加入2%的麦芽糖或尿素。

5.鲁哥氏固定液

称取6g碘化钾(KI)并溶于少量水(10~20 mL)中,待其完全溶解后,加入4g碘(I2)充分摇动,待碘完全溶解后定容到100 mL。

6.戊二醛-锇酸

用于透射电镜及扫描电镜样品的固定,称为戊二醛-锇酸双固定法。使用时用2.5%戊二醛溶液先固定2h或过夜,用缓冲液充分清洗后,再用1%锇酸溶液固定2 h。

7.铬酸-硝酸离析液

铬酸为三氧化铬的水溶液。将铬酸与浓硝酸等量混合均匀后再使用。它适用于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行离析。

8.盐酸-乙醇离析液

将浓盐酸、95%乙醇等量混合备用,一般用于离析根尖细胞。本离析液常用于根尖等细胞的涂片,它能使细胞壁中层(果胶质)溶解,而使细胞分开。

9.醋酸乙醇溶液(离析液)

醋酸与无水乙醇等体积混合。

10.盐酸(水解液)

(1)1 mol/L盐酸配方:取浓盐酸(相对密度为1.19)82.5 mL,用蒸馏水定容至1000 mL。

(2)0.2 mol/L盐酸配方:取浓盐酸(相对密度为1.19)16.5 mL,用蒸馏水定容至1000 mL。

盐酸水解时间对染色效果影响很大。水解时间短,易着色但较难压片;水解时间长,染色慢而色淡;超过20 min或水解温度过高,往往染色极淡或染不上色。各种材料最合适的水解时间有差别。一般来说,大染色体材料水解时间可较长,小染色体材料宜短。改用0.2 mol/L盐酸于60℃恒温下水解10~15 min,对各种类型材料都能获得细胞分离和染色的较好效果。