【实验方法】

【实验方法】

一、贴壁细胞（HeLa细胞）的传代培养

1.选取生长良好的HeLa细胞一瓶，在超净工作台的酒精灯旁，倒去瓶中的旧培养液，加入2～3 mL D-Hanks液，轻轻振荡漂洗细胞1次，以除去悬浮在细胞表面的碎片。

2.加入2滴管0.25%胰蛋白酶消化液，37℃消化2～3 min，倒置显微镜下观察细胞，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶消化液。如消化程度不够，可延长消化时间。

3.用D-Hanks液洗1次，加入1～2滴管培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液。如果发现消化过头，细胞已自行脱落时，则不能倒去消化液，可加少量培养液以中止消化，用吸管反复吹打成细胞悬液并转移到离心管，1 000 r/min离心3～5 min，用培养液再悬浮。

4.HeLa细胞一般以1∶2或1∶3进行分装，1瓶细胞可传为2～3瓶。

5.分装好的细胞，应在培养瓶上做好标记，注明代号和日期，轻轻摇匀，置37℃CO2培养箱中培养。

6.细胞培养24 h后即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况，也可用0.5%台盼蓝染色，以确定死细胞和活细胞的比例。台盼蓝染液可特异性地使死细胞染成蓝色，而活细胞不被染色。(https://www.daowen.com)

二、悬浮细胞的传代培养

因悬浮细胞不贴壁，所以细胞要经离心收集后再传代。其过程如下：

1.取生长良好的细胞，在超净工作台中用无菌吸管把培养瓶中的细胞吹打均匀。

2.将吹打均匀的细胞转移到无菌的离心管中，盖紧胶盖，平衡后1 000 r/min离心5 min。

3.在超净台中去上清液，加入适量新培养液，用吸管吹打细胞，制成悬液。

4.以1∶2或1∶3进行分装，并在培养瓶上做好标记，注明代号和日期，轻轻摇匀，置于37℃CO2培养箱中培养。

5.细胞培养24 h后即可进行观察，形态一般可用相差显微镜进行观察，生长良好的细胞，透明度大，细胞内颗粒少，没有空泡，细胞膜清晰，培养液看不到碎片。