13.3.2　细胞谱系鉴定

细胞是构成类胚胎的基本结构单元，在类胚胎的组织形态学鉴定过程中，特定细胞谱系的身份识别对类胚胎组织形态的观察和记录起着决定性作用。比如囊胚由3种基础细胞谱系共同构成，即处于外圈的滋养外胚层细胞和处于内圈的上胚层细胞和下胚层细胞。比如原肠前胚胎，包括上胚层、羊膜、脏壁内胚层、前脏壁内胚层、腔壁（卵黄囊）内胚层、胚外中胚层、原始生殖细胞、原条细胞、细胞滋养层、合胞体滋养层和绒毛外滋养层等细胞谱系。胚胎发育越往后，其包含的细胞类型越多，空间结构也更复杂。不同细胞谱系具有独特的基因表达模式，我们称那些特异性表达的基因为标志（marker）基因。比如POU5F1（OCT4），通常作为上胚层的标志基因。由于一些marker基因往往会在两种或两种以上类型的细胞中表达，因此，通常要根据两个或两个以上的marker基因组合，才能确定目的细胞的类型。比如TFAP2A和GATA3，在滋养外胚层和羊膜细胞中均有表达，因此，还需借助其他marker基因（滋养外胚层可以用HAVCR，羊膜可以用GABRP）的表达才能进一步确定上述细胞的身份。由于免疫荧光染色技术可以实现多通道并存，因此，免疫荧光染色是当前识别和鉴定类胚胎中不同细胞谱系的常用方法。比如，我们在鉴定类囊胚的三谱系时，通常采用3个marker蛋白的共染色——CK7标记滋养外胚层、SOX17标记下胚层和OCT4标记上胚层。此外，marker基因启动子驱动的报告系统，也被广泛用于不同细胞谱系的鉴定。比如构建人的3D上胚层模型和原肠体时，用BRACHYURY-mCerulean/SOX17-td Tomato/SOX2-mCitrine标记的hPSCs的荧光报告系统，可以在荧光显微镜下实时观察3D上胚层模型的前后轴对称打破和原肠体中的前后轴特化的全过程［91，97］。(https://www.daowen.com)