【实验方法与步骤】

（1）破坏脑、脊髓：取青蛙（或蟾蜍）一只，用自来水冲洗干净（勿用手搓）。左手握住蛙，用食指按压其头前部，使头前俯。右手持毁髓针从蛙两眼间正中线开始向后划，当触到一凹陷处，即为枕骨大孔。用力将毁髓针从枕骨大孔处垂直刺入椎管，然后将毁髓针改向前成30°角通过枕骨大孔刺入颅腔，左右搅动毁髓针2～3次，以充分捣毀脑组织。再将毁髓针抽回至进针处（即枕骨大孔处），向后刺入椎管，捣毀脊髓。毁髓针插入椎管时可见青蛙先下肢僵直，然后呼吸消失，四肢完全松软，失去一切反射活动，表明脑和脊髓已完全破坏。如青蛙仍有反射活动，表示脑和脊髓破坏不彻底，应重新破坏。

（2）剪除躯干上部及内脏：左手提住蛙脊柱，右手持粗剪刀在骶髂关节以上1cm处剪断脊柱。沿脊柱两侧剪开腹腔，使蛙头与内脏自然下垂，然后用粗剪刀将其腹部皮肤、腹肌、内脏及头胸部剪掉，仅留下双后肢、骶骨、脊柱以及由脊柱发出的坐骨神经。注意勿损伤坐骨神经。

（3）剥去皮肤：左手捏紧脊柱断端（注意不要触及坐骨神经），右手捏住断端处皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢皮肤（肛门皮肤黏膜移行处可先行剪开），将标本放入盛有任氏液的培养皿中。

（4）分离双腿：将蛙置于蛙板上，用手术镊夹住脊柱旁边的肌肉，用粗剪刀沿脊柱正中线将脊柱分为两半，再从耻骨联合中央剪开两侧大腿（注意不要损伤坐骨神经）。将分离的两条腿浸入任氏液中，以保持其正常的生理活性。(https://www.daowen.com)

（5）游离坐骨神经：取一条蛙腿放于滴有任氏液的玻璃板上，用图钉将蛙固定，使其尽量展开。然后用玻璃分针沿脊柱两侧游离坐骨神经，再用玻璃分针沿股二头肌和半膜肌间的坐骨神经沟纵向分离大腿部的坐骨神经，并将神经游离至膝关节，最后用眼科剪小心剪断坐骨神经沿途分支。

（6）分离腓肠肌：用玻璃分针分离腓肠肌的跟腱，用线结扎跟腱，在结扎线以下将跟腱剪断。游离腓肠肌至膝关节处，在膝关节以下将小腿其余部分全部剪掉。

（7）制备坐骨神经-腓肠肌标本：将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用粗剪刀将附着于股骨上的组织刮干净，然后在股骨中部剪去上段股骨。这样即得到附着于股骨上、由坐骨神经支配的腓肠肌标本，立即将标本浸于任氏液中。

（8）检查标本的兴奋性：用经任氏液润湿的锌铜弓轻轻接触坐骨神经，如腓肠肌产生收缩，则表示此标本兴奋性良好。