【实验方法与步骤】

【实验方法与步骤】

1.制备离体蛙心标本

（1）取青蛙或蟾蜍一只，用毁髓针破坏脑和脊髓，仰位固定于蛙板上。打开胸腔，暴露心脏。

（2）观察心脏的结构。仔细识别心房、心室、动脉圆锥、主动脉、静脉窦等。心脏下方是心室（蛙只有一个心室），上方是两个心房。心室右上角连着动脉干，动脉干根部膨大为动脉圆锥。动脉向上分成两支。将心脏翻向头侧，心脏背面两心房下面可以看到紫红色的膨大部分，为静脉窦，相当于人的窦房结。

（3）在左主动脉干下方穿一根细线，打一活结备用，再在右主动脉下穿一根线并结扎。

（4）在左主动脉根部的前壁剪开一V形切口，注意切勿剪断动脉。

（5）将充满任氏液的玻璃蛙心插管向动脉圆锥方向插入左主动脉，插至动脉圆锥时略向后退，在心室收缩时，向心室后壁方向下插，经主动脉瓣插入心室腔内。此时可见蛙心插管内液面随心脏跳动而上下移动。将预先打好活结的细线扎紧，并固定在蛙心插管壁的玻璃小钩上防止滑脱。用滴管吸去蛙心插管内液体，用任氏液反复冲洗，至蛙心插管内液体澄清为止。保持套管内液面高度在1.5～2cm。

（6）小心提起蛙心插管和心脏，剪断与心脏相连的血管，注意勿伤及静脉窦。在静脉窦的远方可将腔静脉结扎。用连线的蛙心夹在心舒期夹住心尖。

2.仪器连接

将蛙心插管用双凹夹固定在铁支架上，将蛙心夹上的连线连接到张力换能器的簧片孔上，连线应保持垂直，松紧适度。张力换能器的输入端插头连接至BL-420I系统通道1。做好描记心搏曲线的准备。

3.启动信号采集与分析系统

打开BL-420I系统，选择“实验模块”→“循环”→“蛙心灌流”。开始描记一段正常心搏曲线。

4.蛙心灌流实验观察(https://www.daowen.com)

（1）描记好正常心搏曲线后，将蛙心插管内任氏液全部吸出，加入2～6滴0.65%NaCl溶液，观察并记录心搏曲线的变化。当心搏曲线出现明显变化时，立即用滴管吸去蛙心插管中的灌流液，用新鲜任氏液清洗2～3次，直至曲线恢复正常。

（2）向蛙心插管中加入1～2滴2%CaCl2溶液，观察并记录心搏曲线变化。待心搏曲线出现明显变化后，立即更换任氏液（方法同上），直至曲线恢复正常。

（3）向蛙心插管中加入1～2滴1%KCl溶液，观察并记录心搏曲线的变化。待心搏曲线有明显变化后，立即更换任氏液（方法同上），直至曲线恢复正常。

（4）向蛙心插管中加入1～2滴10-4肾上腺素溶液，观察并记录心搏曲线的变化。待心搏曲线有明显变化后，立即更换任氏液（方法同上），直至曲线恢复正常。

（5）向蛙心插管中加入1～2滴10-4乙酰胆碱溶液，观察并记录心搏曲线的变化。待心搏曲线有明显变化后，立即更换任氏液（方法同上），直至曲线恢复正常。

（6）向蛙心插管中加入1～2滴3%乳酸溶液，观察心搏曲线的变化，待出现明显效应后，立即滴加2.5%NaHCO3溶液2～4滴，观察其心跳恢复过程。

5.观察药物对蛙心搏动的影响

（1）当心搏曲线稳定后，向蛙心插管内加入0.025%毒毛花苷K溶液0.1～0.2 mL，观察心搏曲线的变化。

（2）每隔30s向蛙心插管内任氏液中加入0.025%毒毛花苷K溶液0.2mL，观察心搏曲线的变化（直至出现期前收缩或心动过速）。

（3）当出现心律失常后，向蛙心插管内任氏液中加入2～4滴1%KCl溶液，观察心搏曲线的变化。待心搏曲线有明显变化后，立即用新鲜任氏液清洗2～3次，直至曲线恢复正常。

（4）向蛙心插管中加入1～2滴10-4肾上腺素溶液，观察并记录心搏曲线的变化。待心搏曲线有明显变化后，立即加入10-4普萘洛尔溶液1～2滴，待心搏曲线有明显变化后，立即用新鲜任氏液清洗2～3次，直至曲线恢复正常。

（5）向蛙心插管中加入1～2滴10-4乙酰胆碱溶液，观察并记录心搏曲线的变化。待心搏曲线有明显变化后，立即加入0.05%硫酸阿托品溶液1～2滴，观察并记录心搏曲线变化。待心搏曲线有明显变化后，立即用新鲜任氏液清洗2～3次，直至曲线恢复正常。