分离度R的定义并没有反映影响分离度的各因素。实际上分离度受柱效n、选择性因子α和容量因子k 三个参数的控制。对于难分离物质对，由于它们的分配系数差别小，可令Wb2≈Wb1≈W，k1≈k2≈k，由式（4-18）可导出

将式（4-28）代入式（2-27），得

由式（4-6）及式（4-2），可得

将式（4-30）代入式（4-29），得

式（4-31）即为基本色谱分离方程式。

在实际应用中，往往用ne代替n。由于

即

将式（4-32）代入式（4-31），可得(www.daowen.com)

式（4-33）即基本色谱分离方程式的又一表达式。

（1）分离度与柱效能的关系

由式（4-33）可知，具有一定相对保留值α 的物质对，分离度R 与有效塔板数ne的平方根成正比。而式（4-31）说明，分离度R 与理论塔板数n的关系还受热力学性质的影响。当固定相一定，被分离物质对的α一定时，分离度将取决于n，这时若理论塔板高度H一定，分离度的平方与柱长成正比，即

式（4-34）说明，用较长的柱子可以提高分离度。但这样做将延长分析时间，因此提高分离度的好方法是降低理论塔板高度H，提高柱效。

（2）分离度与选择因子的关系

当α=1 时，由式（4-33）可知，R=0。说明此时无论怎样提高柱效也不能使两组分分开。显然增大α是提高分离度的最有效方法。一般通过改变固定相的性质和组成或降低柱温可有效增大α值。