第2节 脊柱肿瘤的病理学研究方法
脊柱肿瘤的病理学研究方法与一般肿瘤的病理学研究方法基本相同。
一、 常规石蜡切片HE染色
常规石蜡切片苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色技术是经久不衰的病理技术之一。尽管它也存在一些缺点，但仍具有相当多的优点，如：相对快速、经济，满足多数情况下的病理诊断要求，并且技术比较容易掌握。最重要的是应用这项技术能为绝大多数送检标本提供显微镜下形态，利于医师作出准确的描述和考虑到初步甚至最终的诊断意向。然而它对于确定病因、组织发生或发病机制的研究还明显不足。
二、 术中活检冷冻切片HE染色
此法的观察目的：
1. 证明某种病变的存在及其可能的性质 冷冻切片对于脊柱肿瘤的术中诊断也尤为重要。
2. 检查手术切缘是否足够 尤其当累及脊髓附近软组织时，能确切地指导手术切除边界。对于脊柱肿瘤的整体切除而言，理论上应保证冷冻切片确认切缘未直接被累及或未被微卫星病灶所累及。
3. 确认取样有效 确认所得到的标本是今后能够运用HE等其他手段作出更确切诊断的组织，而不是不合格或无效的取样。
由于冷冻切片HE染色本身存在清晰度欠佳及观察范围局限等缺陷，依靠其作出确切诊断的难度较大，需要临床医师和影像学医师向病理医师提供他们较具体的分析意见和倾向性诊断意见，也需要病理医师在临床医学和影像学意见的基础上合理地应用病理学知识，在“三结合”的基础上分析判断，并具有相当的“冷冻实战”经验，才能尽量地避免冷冻切片诊断中的错误。
三、 免疫组织化学、特殊染色、电子显微镜
（一） 免疫组织化学
免疫组织化学是近20多年来飞速发展的一种方法，是目前外科病理学不可缺少的常规辅助诊断工具。已广泛应用于外科病理学各个领域，大大地提高了外科病理学的诊断水平。
免疫组织化学是原位免疫学原理和技术在细胞和组织形态研究中的应用。目前有数种方法可供使用，应用得较多的方法是过氧化物酶-抗过氧化物酶免疫复合物方法和生物素-卵白素免疫酶技术，以及在此基础上不断改进的新方法，如链霉素亲和素-过氧化物酶连接法、SABC法等。现已设计出多种“抗原暴露”技术，用来提高敏感性，其目的是把其他情况下可能不暴露（“遮蔽”）的抗原（抗原表位）暴露出来。
免疫组织化学在脊柱肿瘤病理诊断中的应用有助于更深入地分析：① 是否是肿瘤？② 肿瘤的增殖活性和良恶性；③ 原发？或转移？④ 大的类型？亚型？⑤ 判断转移性病灶的来源，尤其是对一些首先发现于脊柱的转移性肿瘤，免疫组织化学的结果可能有助于我们推测其来源，意义十分重大，尽管并不总是能准确地判断其起源部位。(https://www.daowen.com)
免疫组织化学也存在着多种因素的局限，可能会造成假阴性或假阳性的结果。如异位的抗原表达，抗体与组织非特异性结合及至今不明原因的交叉反应，原先认为特异性很高的抗体经常经过历史的检验被证明并非如前所认为的那么特异等。因此在临床解释免疫组织化学结果时应强调其仅仅是辅助性的，应从属于HE观察，同时必须是在结合临床诊断意见及影像学诊断意见的基础上，最后才能得出相对准确的判断。
（二） 特殊染色
特殊染色是比免疫组织化学技术开发和应用得更早的辅助诊断手段。在诸多特殊染色中，仅小部分在骨相关肿瘤病理诊断中具有真正的辅助诊断价值。相对而言，与脊柱肿瘤病理诊断联系较为密切地有：
1. PAS染色 此法可以确定糖原或糖蛋白等物。一些肿瘤的瘤细胞内含有丰富的糖原，用此法可在一定程度上协助其诊断。如骨Ewing肉瘤、转移到骨的肾透明细胞癌和某些其他含糖原肿瘤（附近的皮肤汗腺肌上皮瘤等）等。
2. 网状纤维染色 可显示“网状纤维”和基底膜物质。网状纤维主要由纤细的Ⅲ型胶原纤维组成，广泛地分布于体内结缔组织和基底膜中。有时一些未分化癌与肉瘤两者HE形态很相似，未分化癌阳染的网状纤维包绕在癌巢周围，在巢内癌细胞间为阴性；肉瘤细胞相互间则含较多阳性染色的网状纤维。
3. 髓鞘染色 是以Luxol固蓝为核心的，用来显示髓鞘质的非免疫组织化学方法。它是基于铜肽菁染料与磷脂和胆碱基具有强亲和性的原理。
4. 黏液染色 可以显示中性、弱酸性和强酸性黏液物质，用于某些黏液分泌性肿瘤的诊断和鉴别诊断。
（三） 电子显微镜
电子显微镜在肿瘤病理学诊断中能提供重要信息，偶尔甚至是关键的诊断信息。如在颗粒细胞瘤、神经鞘瘤、Langerhans组织细胞增生症、间皮瘤、梭形细胞胸腺瘤、不同部位的类癌和小细胞癌、精母细胞性精原细胞瘤等的诊断中。
但我们必须充分认识到电镜在肿瘤诊断中的局限性：① 无论在哪一点取样，用于研究的只是肿瘤的极微小的部分。② 常缺少专一的特异性超微结构特征，因为专属于一种细胞或组织类型的细胞器或其他特征结构极少。③ 可能将混杂在肿瘤中的非肿瘤细胞成分误认为是肿瘤细胞而被研读。
电镜应用的时机是病理医师已在光镜水平将肿瘤的鉴别诊断范围缩小到2～3种肿瘤之内，然后对组织进行超微结构检查，以寻找期待的每种疾病的相对特异性结构或标记物。
四、 分子病理和基因检测技术
在过去的1/4世纪中，分子生物学的革命性进展对外科诊断病理学实践产生了越来越重要的影响。分子病理检测技术对于外科病理医师的重要性在于它们不仅可应用于新鲜标本组织，而且还可应用于部分常规病理处理后的组织（如适合应用于福尔马林固定的石蜡包埋的材料）。其中，原位杂交（in situ hybridization, ISH）是应用标记的互补核酸序列或探针检测组织切片或细胞样本中特定的DNA或RNA序列。在适当的条件下，探针（通过氢键的建立）与靶DNA或RNA杂交，并通过探针中标记的放射活性物质或非放射性物质（过氧化物酶、生物素、地高辛配基）得以显示。原位杂交技术主要用于肿瘤特殊成分的癌基因表达定位，荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）还可用于特定基因扩增的检测等。其他重要的技术还包括：PCR相关的突变和融合基因检测、分裂间期细胞遗传学研究技术等。一系列肿瘤分子病理学新技术包括二代测序等的开展和应用，将给精准诊断与治疗带来新的巨大推动力。