四、人工授精
人工授精流程主要包括：场地器械的准备→采精→精液检查→精液稀释和保存（包括冷冻保存）→解冻→输精（用冷冻精液则需经解冻）。
1.准备工作
准备一间向阳、干净的配种间。配种间包括采精场地、精液品质检查场地和输精场地。如果在农户或养羊较少的专业户，也必须准备一间干净的羊圈或羊棚作为输精场地，配种间要求光线充足，各部分工作场地要互相连接，以利于工作，地面坚实（最好铺砖块），以便清洁和减少尘土飞扬，空气要新鲜，室温要求为18～25℃。人工授精的各种器械要准备齐全，见表5-1。采精、输精前，各种器械必须清洗和消毒。要用肥皂水洗刷除去污物，对新购入的金属器具必须先除去防锈油污，再用清水冲洗净，然后用蒸馏水冲洗1次，消毒备用。玻璃器械采用干热消毒法，其余器械可用蒸汽消毒。
表5-1 羊人工授精所需的各种主要器械
2.采精
（1）羊假阴道的准备 种公羊的精液用假阴道采取。假阴道为筒状结构，主要由外壳、内胎和集精杯组成，外壳是硬胶皮圆筒，长20厘米、直径4厘米、厚约0.5厘米；筒上有灌水小孔，孔上安有橡皮塞，塞上有气嘴。内胎为薄橡胶管，长30厘米，扁平直径为4厘米。用时将内胎装入外壳，两端向假阴道两端翻卷，并用橡皮圈固定。内胎要展平，松紧适度。集精杯装在另一端（图5-1，彩图24）。
图5-1 羊用假阴道
羊人工采精
采精前，将安装好的假阴道内胎先用肥皂水清洗，后用温清水冲洗，外壳用毛巾擦干，内胎最好晾干。干后用95%酒精棉球涂抹内胎，装上集精杯，用蒸馏水或温开水和1%生理盐水冲洗。然后由小孔注入50℃热水150～180毫升，再用消毒过的玻璃棒蘸上一些消毒过的凡士林，涂在内胎上，注意涂均匀，深度不超过阴道的2/3。由小孔上的气嘴向小孔吹气，使内胎鼓胀，以恰好装进公羊的阴茎为宜。临采精前，内层的温度应在40～42℃，温度过高或过低都会影响公羊射精。
（2）台羊的准备 对公羊来说，台羊（母羊）是重要的性刺激物，是用假阴道采精的必要条件。台羊应当选择健康的、体格大小与公羊相似的发情母羊。用不发情的母羊作为台羊不能引起公羊性欲时，可先用发情母羊训练数次即可。在采精时，须先将台羊固定在采精架上。对经过采精训练的公羊也可以利用假台羊进行采精（图5-2）。
图5-2 假台羊
（3）采精技术 公羊爬跨迅速，射精动作快。因此，要求采精人员应动作迅速、准确。采精时，采精人员右手拿假阴道，蹲伏在母羊或右侧后方，公羊爬跨并伸出阴茎时，迅速将假阴道靠在母羊右侧盆部，与地面呈35°～40°角，左手托住公羊阴茎包皮，将阴茎快速导入假阴道内。当公羊身体剧烈耸动时，表明已经射精。采精人员应将假阴道顺沿公羊向后移下，然后竖起，使有集精杯的一端向下，及时打开气嘴放气，使精液流入集精杯。取下集精杯，加盖，送室内做精液品质检查（彩图25、彩图26）。
采精后，假阴道外壳、内胎及集精杯要洗净，用肥皂水、氢氧化钠水溶液洗刷，再用过滤开水洗刷3～4次，晾干备用。
3.精液品质检查
最少在一个配种季节的开始、中期、末期检查3次，主要检查色泽、气味、射精量、活力、密度。采精后将精液倒入量精瓶，查色、味、量。
（1）射精量检查 一次射精量，绵羊为0.8～1.5毫升，山羊1毫升左右，1毫升精液有20亿个以上的精子。
（2）色泽和气味检查 正常精液呈乳白色或略带浅黄色，浓稠，无味或略带腥味。
（3）密度检查 精子密度的大小是精液品质优劣的重要指标之一。用显微镜检查精子密度的大小，其制片方法是（用原精液制片）：用消毒过的干净玻璃棒取原精液1滴，或用生理盐水稀释过的精液1滴，滴在消毒过的干净且干燥的载玻片上，并盖上干净的盖玻片，盖时使盖玻片与载玻片之间充满精液，避免气泡产生，然后放在显微镜下放大300～600倍进行观察。观察时盖玻片、载玻片、显微镜载物台的温度不得低于30℃，室温不能低于18℃。一般放在显微镜保温箱中进行检查（图5-3）。
图5-3 显微镜保温箱（单位：厘米）
精子的密度分为“密”“中”和“稀”3级（图5-4）。
密：精液中精子数目较多，充满整个视野，精子与精子之间的空隙很小，不足1个精子的长度。由于精子非常稠密，所以很难看出单个精子的活动情形。
图5-4 羊精子密度示意图
中：在视野中看到的精子也很多，但精子与精子之间有着明晰的间隙，彼此间的距离相当于1～2个精子的长度。
稀：在视野中只有少数精子，精子与精子之间的间隙很大，约超过2个精子的长度。
另外，在视野中如看不到精子则以“0”表示。
提示
公羊的精液含副性腺分泌物少，精子密度大，所以用于输精的精液，其精子密度至少是“中级”。
（4）活力检查 一般精子的活力检查和精子的密度检查同时进行，制片方法相同。评定精子的活率，是根据显微镜中视野下直线前进运动的精子所占的比例来确定精子活率等级，在显微镜下观察，可以看到精子有3种运动方式：
1）前进运动。精子的运动呈直线前进运动。
2）回旋运动。精子虽也运动，但绕小圈子回旋转动，圈子的直径很小，不到1个精子的长度。
3）摇摆运动。精子不改变其运动的位置，而在原地不断摆动，并不前进。(https://www.daowen.com)
除以上3种运动方式之外，还可以看到没有任何运动的精子，呈静止状态。除第一种精子具有受精能力外，其他几种运动方式的精子不久即会死亡，没有受精能力，故在评定精子活率等级时，应根据显微镜下活泼前进运动的精子在视野中所占的比例来决定：若有80%的精子做直线前进运动，其活率评为0.8，以此类推。一般公羊精子的活率应在0.7以上才能供羊输精用。
4.精液稀释
检查合格的精液，稀释后才可输精。稀释液配方应选择易于抑制精子活动，减少能量消耗，延长精子寿命的弱酸性稀释液。常用的稀释液有：
（1）奶汁稀释液 奶汁先用7层纱布过滤后，再煮沸消毒10～15分钟，降至室温，去掉表面脂肪即可。稀释液与精液一般按（3～7）∶1的比例稀释。
（2）生理盐水卵黄稀释液 1%氯化钠溶液99毫升，加新鲜卵黄10毫升，混合均匀。
精液稀释要根据精子密度、活力而定稀释比例。稀释后的精液，每毫升有效精子量不少于7亿个。
精液与稀释液混合时，二者的温度必须保持一致，防止精子受温度剧烈变化的影响。因此，稀释前将2种液体放于同一水温中，同时在20～25℃时进行稀释。把稀释液沿着精液瓶缓缓倒入，为使混合均匀，可稍加摇动或反复倒动1～2次。在进行高倍稀释时需分2步进行，即进行低倍稀释，等数分钟后再做高倍稀释。稀释后，立即进行活力镜检，如果活力不好要查出原因。
5.精液分装、运输与保存
（1）精液分装 将稀释好的精液根据各输精点的需要量分装于2～5毫升的小细试管中，精液面距试管口不小于0.5厘米，然后用玻璃纸和胶圈将试管口扎好，在室温下自然降温。
（2）短途运输 将降温到10～15℃已分装好精液的小试管用脱脂棉、纱布包好，套上塑料袋，放在盛满凉水的小保温瓶内，即可运到输精点。
提示
在农村，短途运输的工具为自行车或摩托车，5千米与10千米的运输距离对精子活力影响不显著。
（3）精液保存 精液在稀释后即可保存。现行保存精液的方法，按保存温度不同，分为常温保存（15～25℃）、低温保存（0～5℃）和冷冻保存（-79℃或-196℃）3种。
1）常温保存。精液运到输精点，不能马上用的精液或当晚、第二天早晨用的精液需常温保存。常温保存是将精液保存在温度为15～25℃的环境中，允许温度有一定的变动。该方法无须特殊的温度控制设备，比较简便。绵羊精液采用常温保存比低温或冷冻保存的效果好。一般绵羊、山羊精液常温保存48小时后，存活率仍可达原精液的70%。
2）低温保存。将精液保存在0～5℃环境中称为低温保存。它是在精液不致结冰的情况下大幅度地降温，一般是将精液稀释后放入温度维持在0～5℃的冰箱内或装有冰块的保温瓶中。低温对精子的冷刺激易造成不可逆转的休克现象，因此除了在稀释液中添加卵黄、奶类、甘油等保护物质外，还应注意降温的速度。从30℃降到精子冷休克的敏感温度0～10℃时，以每分钟下降0.2℃左右为好，降温过程一般需1～2小时。由于绵羊、山羊精液的某些限制因素，采用低温保存的效果不理想。
3）冷冻保存。它是将分装好的精液直接放入液氮中，使之温度快速降到冰点以下，使之冻结起来，故又叫超低温保存，温度为-196℃。在此温度下，精子代谢完全停止，故保存时间大为延长，经数月乃至数年仍可用于人工授精。
（4）冷冻精液解冻方法 采用细管、安瓿等分装的冻精，可以直接在35～40℃的温水中解冻，只等细管或安瓿内的精液融化一半时，便可以从温水中取出来以备使用。解冻颗粒精液有干、湿2种方法：方法一，湿法解冻，就是在灭菌试管内注入1.9%枸橼酸钠解冻液1毫升，将试管在水浴中加热至35～40℃，取出颗粒精液投进试管内，摇动融化以备使用。方法二，干法解冻，即直接将颗粒冻精置于灭菌试管内，然后在水浴中加热至35～40℃解冻即可。冷冻精液解冻后立即进行镜检，活力达到0.3以上的就可以用于输精。
提示
要提高冻精的受胎率，一般采用1∶1的低倍稀释、40℃干法快速解冻、1亿左右有效精子数的大量输精和一个发情期二次重复输精等方法效果较好。
6.输精
将洗干净的输精器用70%酒精消毒内部，再用温开水洗去残余酒精，然后用适量生理盐水冲洗数次后使用。开膣器洗净后放在酒精火焰上消毒，冷却后外涂消毒过的凡士林。
将配种母羊置于固定架上，用0.1%高锰酸钾溶液洗净外阴部，再用清水冲洗干净后，输精员右手持输精器，左手持开膣器，先将涂有润滑剂的开膣器顺着阴门插入阴道，旋转90°，再将开膣器轻轻打开，插入输精针，用手电筒找到子宫颈口，再将输精针插入子宫颈口0.5～1.0厘米深处，轻轻注入精液，然后缓慢取出输精针和开膣器（图5-5、图5-6、彩图27和彩图28）。开膣器在阴道内始终保持开张状态，不能闭合，以免夹伤生殖道。输精量一般为0.1毫升，有效精子数不少于5000万。输精后在母羊的腰椎部位用手捏一下，可刺激宫颈收缩防止精液流出。
图5-5 羊开膣器输精法实操图
图5-6 羊开膣器输精法示意图
羊人工授精
羊子宫角输精
为提高母羊受胎率，每次发情，输精2次，在输精后的8～12小时再重复输1次。一般每只母羊每次输精0.1毫升，有效精子不少于0.5亿个。若稀释4～8倍时，应增加到0.2毫升，处女羊进行阴道输精时，输精量也应加倍。
如果在打开开膣器后，发现母羊阴道内黏液过多或有排尿表现，应让母羊排尿或设法使母羊阴道内的黏液排净，然后将开膣器再插入阴道，细心寻找到子宫颈。发情母羊子宫颈附近的黏膜颜色较深，当阴道打开后，向颜色较深的方向找子宫颈口，可以顺利找到。遇到初配母羊，由于阴道狭窄，开膣器打不开，只有进行阴道深部输精，但应当进行大剂量输精，输入0.2～0.3毫升。
输精后的母羊应保持2～3小时的安静状态，不要接近公羊或强行牵拉，因为输入的精子通过子宫到达输卵管受精部位需要有一定时间。
母羊输精后应做好详细记录：主要记录输精母羊号、发情情况、羊龄、输精日期、精液类型及与配公羊号。
7.山羊人工授精注意事项
山羊人工授精方法与绵羊大致相同，但应注意几个技术问题。山羊比绵羊行动敏捷，种公羊性行为和性冲动反应快，一般配种室最好装一个长30厘米、宽60厘米、高20厘米的斜架台作为采精台。成年公羊采精1周休息1天，每天可采2～3次，连续采2次间隔15～30分钟。采精前用温水清洗公羊包皮，然后用干净毛巾擦净。山羊精液密度大，一般稀释2～5倍后输精为宜，主要视精液密度和活力而定。
