检验科工作岗位及流程

(五)检验科 工作岗位及流程

1.人员准备

图示

2.物品准备(每天8:00—8:30)

图示

3.新型冠状病毒核酸检测流程

(1)采样:采样人员按要求做好个人防护。用两根咽拭子同时擦拭双侧扁桃体及咽后壁,将拭子头浸入含病毒保存液的采样管中,尾部折断弃去,旋紧管盖,注明标本编号、姓名等。将盖紧后的标本放入密封袋中,封好口,置于特殊标识的标本转运箱中。血样等其他样本,可按常规送检流程。

(2)院内运输:标本运送人员按要求做好个人防护。每天8:00、14:30,章贡院区标本转运箱由救护车转运、黄金院区标本转运箱由物业人员转运至黄金院区住院部南楼2楼检验科,与检验科标本收集室人员交接转运箱。

(3)检验科实验室内标本转运:检验科标本收集室人员应佩戴帽子、一次性外科口罩、手套、隔离衣。接收标本转运人员的转运箱,用含有效氯0.5%的次氯酸钠消毒液喷转运箱外部,并送至检验科PCR实验室第四区缓冲间。

(4)检验科新型冠状病毒核酸检测:检验科新型冠状病毒核酸检测人员应穿一次性医用防护服、戴防护面罩、双层手套、医用防护口罩、防护鞋套。每天进行两批标本检测。

进入潜在污染区,依次戴医用防护口罩、一次性帽子、换工作鞋,穿工作服、戴手套。

进入污染区,换防护服,戴护目镜、双层手套、医用防护口罩、防护鞋套。

所有冠状病毒核酸检测程序在PCR实验室第四区完成。所有开盖操作必须在生物安全柜内进行,手从生物安全柜抽出之前要消毒并换干净手套,不要戴着污染的手套抽出生物安全柜去做其他事情。

①灭活病毒:取出病毒保存管,用含有效氯0.5%的次氯酸钠消毒液喷塑料密封袋和采集管外壁,置于56℃水浴锅,30分钟灭活病毒。

②核酸提取

A.在生物安全柜内,将蛋白酶K稀释液加入蛋白酶K中,颠倒混匀10次,使其完全溶解。

B.取出预封装试剂,颠倒混匀数次使磁珠重悬。去掉真空包装,轻甩孔板,使试剂及磁珠集中在底部,小心撕去铝箔封口膜,避免震动,防止液体溅出。

C.在生物安全柜内,于第1列、第7列分别加入20μL蛋白酶K溶液,最后加入200μL标本(枪头插入液面内加样),加完样品静止10分钟。

图示

新型冠状病毒核酸检测流程图(https://www.daowen.com)

D.用自动核酸仪提取病毒核酸,注意盖紧防护罩,约40分钟。

E.用75%酒精或含氯消毒液擦拭生物安全柜台面,并照紫外30分钟。

F.用75%酒精擦拭自动核酸仪加样针及仪器台面,并照紫外30分钟。

③荧光定量PCR检测

A.将试剂在4℃避光融化,充分混匀后瞬离。按以下比例配置混合液,并加入8联管中。

图示

B.标本核酸、阴性对照、阳性对照各加入5μL,总体积25μL。

C.荧光定量PCR扩增检测(ABI7500)。

图示

注:ABI 7500不选ROX校正,淬灭基团选None。

D.结果判读(ORF1ab/N)。

阴性对照:Ct值>38或未检出。

阳性对照:扩增曲线S型,且Ct值≤30。

阴性:Ct值>38或未检出。

阳性:扩增曲线S型,且Ct值≤35。

可疑:扩增曲线S型,且35<Ct值≤38,需复检。复检一致,为阳性。

4.报告发放

阴性结果直接审核发放,阳性结果不审核,电话通知科主任,并由科主任通知院感科主任及医院领导

5.阳性样本由院感科报送赣州市疾病预防控制中心。

6.清洁及医疗废物处理

(1)将废弃物打包,扎紧袋口,喷洒消毒液后出实验室至消洗间进行高压消毒。

(2)用含氯消毒液喷撒房间,空气消毒机和紫外消毒30分钟。

(3)离开污染区,先消毒双手,依次脱防护眼镜、医用防护口罩、防护服、鞋套、手套等,放入专门垃圾袋中。防护服用含含氯消毒液均匀喷雾后按要求脱下,放入高压袋中待进一步高压灭菌处理。离开潜在污染区,先洗手与手消毒,脱去工作服,洗手和手消毒。