Osterix1-Cre和Osx-CreER

在骨相关细胞分化过程中，当成骨细胞祖细胞分化为成熟的成骨细胞时，它的蛋白表达模式也将发生改变［37］。在此分化通路中，有两种特异性的标记因子：Runx2和Osterixl。如图2-11所示，哈佛大学分子细胞生物学科的Stephen J.Rodda和Andrew P. McMahon通过Osterixl启动子转录调控Cre重组酶，合成出Osxl-Cre结构，并将其同源性重组于Osterixl转座子的1号外显子序列中［9］。Cre的表达不仅受到Osterixl启动子调控，并且含有GFP报告基因，便于检测。此外，Cre-GFP结构前还融合有四环素关闭调节编码框 (TETOff)，以便进一步调节Cre表达。

除报告子GFP可被用于验证Osxl-Cre的表达外，R26报告小鼠也被用来通过β-gal活性进一步验证Cre的表达。与预期的Osterixl表达相一致，两种检测方法共同证实Cre可表达于软骨内-膜内骨中。ED14.5的胫骨切片X-gal染色及GFP荧光均显示，在内骨形成软骨膜及零星的肥大化软骨细胞中均可检测到Cre的阳性表达。进一步验证显示，自胚胎发育阶段至新生阶段，Osxl-Cre的活性仅在成骨细胞系中表达［9］。

Zhou等人利用Cre转基因小鼠研究和N-Myc基因在胚胎骨骼发育各时期中的作用，发现其对于间充质干细胞的增殖及向骨和软骨细胞的分化具有决定性作用。然而在Osxl-Cre小鼠中敲除c-Myc和N-Myc则没有显著变化，说明其主要作用于间充质细胞而非成骨前体细胞［38］。(https://www.daowen.com)

图2-11　Osxl-Cre转基因结构