病毒的分离培养

脊髓灰质炎病毒感染机体，IgM 抗体的免疫应答反应最早在感染后10d～15d 即可被捕捉ELISA 法检测到。一般持续1 个月后消失。在疑似脊髓灰质炎患者血液中，尤其是脑脊液中查到IgM抗体是一种早期快速特异的诊断方法。但目前所谓的IgM 抗体不能区别疫苗株和野毒株，故IgM 阳性的意义，只有在明确近期无服苗的情况下才能应用.但从脑脊液中查到特异性IgM 抗体，如血脑屏障正常，则即可结合病史诊断为疫苗相关病例或为野毒病例.在AFP 患者因故未收集到合格的大便标本如在麻痹1 个月内血液IgM 抗体阴性可排除诊断。

实验室确诊对脊灰诊断至关重要，其基本方法是从AFP 病例粪便标本中分离脊灰病毒，并辨别分离到的病毒是野病毒还是疫苗株。通过WHO 提供的检测肠道病毒感染的试验原理和检测程序，同时也适用于肠道病毒分离物鉴定的血清分型。两种细胞系被推荐用于粪便标本中病毒的分离：一个是来源于人类横纹肌肉瘤的RD 细胞；另一个是来源于鼠1 细胞系的L20B 细胞，遗传学上已转换为人类PVR。RD 细胞对脊灰病毒感染非常敏感，在组织培养中能产生高滴度病毒，同时RD 细胞还有助于其他人类肠道病毒（除柯萨奇B 病毒）的复制。L20B 细胞有助于脊灰病毒的复制，但能抵抗多数非脊灰肠道病毒的感染，因此L20B 细胞用于脊灰病毒的选择性培养。(https://www.daowen.com)

开展病毒分离时，使用标准或倒置显微镜每天观察细胞培养管，记录接种管和对照管细胞所发生的变化至少1 周，记录CPE（1+～4+）提示细胞受毒性反应、老化或污染的影响而发生的变化（1+，＜25%；2+，25%～50%；3+，50%～75%；4+，75%～100%）。如果有特征性的肠道病毒CPE 出现，例如细胞变园，折光增强并脱离管壁，应记录下来，并观察直到75%的细胞发生变化（3+CPE），然后保存在－20℃以备二次传代。同一病例的二次传代的病毒分离物可以放到一起用于定型或型内鉴定。如果7d 之后无CPE 出现，再盲传1 代继续观察7d。如果RD 细胞出现阳性结果而14d 后L20B细胞仍然阴性，要将RD 细胞的阳性分离物在L20B 细胞上续种一代，并且再观察7d 以排除脊髓灰质炎病毒存在的可能性。

除肠道病毒外，含有一些其他病毒（如肠病毒和肠腺病毒）的粪便标本接种到L20B 细胞上也会产生CPE。一些非脊髓灰质炎肠道病毒也可在肺组织细胞和L20B 细胞上产生CPE，应该进行脊髓灰质炎病毒定型试验以排除含有脊髓灰质炎病毒的可能性。如果定型结果不能确定或无法解释，必须将此标本送国家脊髓灰质炎实验室进行进一步分析。