9.2.4　总RNA抽提和qRT-PCR定量分析

使用m iRcute血 清／血 浆miRNA分 离 试 剂 盒（TIANGEN BIOTECH，中国）抽提血清总RNA，使用NanoD rop 2000（Thermo，美国）进行定量。利用m iRcute PlusmiRNA First-Strand cDNA试剂盒（天根生物科技有限公司，中国）对每个样品的总RNA（1μg）进行反转录。使用2×SYBR qPCR Master Mix（庄盟国际生物技术有限公司，中国）进行实时定量PCR，对miRNA表达进行相对定量。为了使miRNA表达均一化，研究选择了U6作为内参基因。每个样品检测三次，然后使用2－ΔΔCt方法分析表达数据［26］。有关miRNA和U6的引物信息，见表9-1。

表9-1　miRNA 的上游引物和U6的引物信息