2.方法

（1）丙酮粉制备、酶液提取和两途径酶系活力测定均按施教耐等1965年报道的方法。

（2）呼吸的测定。种子分别放在盛有碘乙酰胺（0.05 mol/L）或氟化钠（0.1 mol/L）称量瓶中，减压渗入，然后用Warburg呼吸器测定种子吸氧量。

（3）抑制剂的分离和初步提纯。将油菜花蕾丙酮粉提取液于水浴中煮沸5分钟，离心弃蛋白沉淀。上清液用纸层析和电泳进行分离和提纯。有的试验中，在纸层析和电泳前，花蕾提取液还经氯仿和苯多次萃取，以除去脂溶杂质。(https://www.daowen.com)

（4）纸层析。用20×17.5 cm2Whatman 1号滤纸，每张点样5 ml。采用的溶剂为丙酮∶甲酸∶水（20∶10∶70）。在25℃下，下行24小时左右。晾干后，从底线开始至溶剂前沿剪成等距离4段，依次标以1、2、3、4，加上点样区共5段。各用5 ml重蒸馏水浸提。测定浸提液对G-6-P脱氢酶或6-PG脱氢酶活力的抑制程度。

（5）电泳。队式电泳槽，电压400 V。滤纸带2×36 cm2。点样0.5 ml。室温下，在硼酸缓冲液（pH 9）中，从正极向负极电泳4小时。完毕，待滤纸干后，按色泽不同，剪成数段，各用4 ml重蒸馏水浸提后，测定对脱氢酶的抑制作用。