油菜籽实形成过程中HMP和EMP途径酶系活力的变化
1）HMP途径的酶系活力
如图1（a）所示，在籽实形成过程中，G-6-P脱氢酶和6-PG脱氢酶活力上升，尤以花后10～20天或20多天间上升较快，如G-6-P脱氢酶活力增加了4倍多。转化R-5-P的酶活力从花蕾直到花后30天也是逐渐上升的。
2）EMP途径的酶系活力
（1）G-6-P异构酶。从花后8～15天，活力也是下降，而15天以后，一直到30天，却有所上升（见表1和图2），或者在有的试验中维持不变。
表1 不同年龄油菜荚G-6-P异构酶活力的变化
*活力单位=每15分钟转化1 μmole G-6-P。
（2）F-6-P激酶。随籽实的成长，活力迅速下降，至30天已降得很低［见图1（b）］。
（3）醛缩酶。从花蕾到花或幼荚活力略有上升，以后随油菜荚的长大，活力迅速下降，如以花后30天与10天比较活力下降达3倍［见图1（b）］。
（4）3-磷酸甘油醛脱氢酶。该酶活力表现的规律类似于G-6-P异构酶，从花后8天至15天活力略有下降，以后随年龄增长，活力逐渐升高（见图2）。(https://www.daowen.com)
（5）磷酸甘油酸激酶和从“3-PGA至丙酮酸”的酶系。如图2所示，这些酶的活力均随着油菜荚年龄的增长而迅速下降。如40天与8天相比，3-PGA激酶和从“3-PGA至丙酮酸”酶系活力分别下降了6倍和1.7倍。
图1 油菜籽实形成过程中HMP和EMP途径几种酶的活力变化
反应系统如下：
（a）G-6-P脱氢酶和6-PG脱氢酶：双甘氨肽 125 μmoles（pH 7.5），MgCl2 10 μmoles，G-6-P（或6—PG）5 μmoles，NADP 0.27 μmol（e纯度78%），酶液0.5 ml，总体积3 ml，空白缺NADP。反应混合物预先在38℃水浴中预温5分钟，酶液的加入作为反应的开始。任意规定最初5分钟在340 mμm处光密度增加0.01时（用Beckman DU型分光光度计，比色杯1 cm）的酶活力为1个单位。
R-5-P“转化”酶：双甘氨肽 88 μmoles（pH 7.5），R-5-P 10 μmoles，核黄素1.5 μmoles，半胱氨酸1.5 μmoles，MgCl2 10 μmoles，NADP 0.5 μmole，总体积3 ml。空白缺R-5-P，酶液0.5 ml，温度38℃，并以转化R-5-P的微克分子数表示活力单位。
（b）F-6-P激酶：Tris缓冲液（pH 8.6）100 μmoles，亚硫酸氢钠（pH 8.6）250 μmoles，F-6-P 4 μmoles，ATP 6 μmoles，MgCl2 10 μmoles，酶液0.5 ml，总体积3 ml。于38℃保温15分钟，测定形成的磷酸丙糖量，并规定使0.1 μmole F-6-P磷酸化的酶活力为1个单位。
醛缩酶：巴比妥钠酸缓冲液（pH 8.6）100 μmoles，亚硫酸氢钠（pH 8.6）250 μmoles，FDP 12.5 μmoles，酶液0.5 ml，总体积3.0 ml。在38℃反应半小时。加等体积20%三氯乙酸终止反应。用碱性介质中二硝基苯肼显色法测定形成的磷酸丙糖量，并规定使1个微克分子FDP分解的酶量为1个活力单位。
图2 油菜籽实形成过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶、G-6-P异构酶、3-PGA激酶和“3-PGA-丙酮酸”酶系的活力变化
1—3-磷酸甘油醛脱氢酶；2—G-6-P异构酶；3—“3-PGA-丙酮酸”酶系；4—3-PGA激酶
反应系统如下：
3-磷酸甘油醛脱氢酶：Tris（pH 8.5）150 μmoles，FDP 10 μmoles，NaF 10 μmoles，砷酸钠17 μmoles，谷胱甘肽15 μmoles，NAD 1 μmole，酶液0.5nl，总体积3ml，空白者缺NAD。于室温下用日立分光光度计测定340 μm处的光吸收。
3-PGA激酶：Tris（pH 7.4）100 μmoles，3-PGA 20 μmoles，ATP 8 μmoles，MgCl2 6 μmoles，羟氨1 000 μmoles，酶液0.1 ml。总体积1.3 ml，38℃，反应30分钟。加3 ml FeCl3-HCl-三氯乙酸*终止反应，测定形成的1，3-二磷酸甘油酸。
（FeCl3-HCl-三氯乙酸溶液配法：FeCl3·6H2O 8.3 g，20 g三氯乙酸溶于42 ml浓HCl中，加蒸馏水至500 ml）
从3-PGA至丙酮酸形成的酶系：Tris（pH 7.4）150 μmoles，3-PGA 20 μmoles，ADP 10 μmoles，MgCl2 10 μmoles，2，3-DPGA 30 μg，KCl 25 μmoles，酶液0.2 ml，总体积2.0 ml，于30℃保温30分钟。杀死酶液，用二硝基苯肼测定形成的丙酮酸。
3-磷酸甘油醛脱氢酶和3-PG至丙酮酸形成酶每小时使1微克分子底物转化的活力规定为1个活力单位。
