2.方法

（1）标记葡萄糖的饲喂和C14O2的测定。油菜荚取下后迅速剁壳，小心取出种子（0.5～1.0 g），放入50 ml容量的康惠皿中，皿中加pH 6.5的磷酸缓冲液和其他试剂，总体积5 ml。中央井放玻璃小碟一只，内加KOH（20%）0.2 ml，在皿缘涂上凡士林，最后向皿中加标记葡萄糖（0.5～2.0 ml），迅速盖上玻片，用橡皮圈扎紧，于30℃恒温箱中保温4小时。待保温结束后，取出玻璃小碟子红外灯下烘干，用盖革氏计数管计数，测定C14O2的强度。另外，吸干皿中溶液，用丙酮杀死和固定种子，备作脂溶物测定。脂溶物按下法测定：用研钵研碎种子，用丙酮提取4～5次，合并后在红外灯下蒸去丙酮，再用石油醚溶出脂溶物，铺样记数。标记葡萄糖的吸收率是根据保温前后溶液放射性强度的差别算出。根据喂入的标记葡萄糖在0.2 ml 20%KOH中（烘干）的放射性强度，种子对标记葡萄糖的吸收率和放出的C14O2放射性强度算出C14O2的回收率；根据标记葡萄糖的喂入量，吸收率和脂溶物的放射性强度，算出脂溶物的回收率。

（2）标记醋酸的饲喂和脂溶物的测定。30天种子0.25 g对半切开，置于离心管中，加磷酸缓冲液（pH 5.5）30 μmoles和其他试剂成所需浓度（以水为对照），总体积为0.75 ml，于30℃左右保温2小时。按Bligh和Dyer（1959）的方法分离脂溶物：加0.05 ml 2N HCl杀死种子，用匀浆器磨碎，加3ml氯仿-甲醇（1∶2）摇匀，再加i ml氯仿摇匀分层，最后加l ml水摇匀离心，取出下层氯仿层0.2 ml铺样记数，得到脂溶物的放射性强度。

（3）呼吸的测定。采用标准的瓦氏呼吸器技术。迅速称取0.1 g种子置于瓦氏瓶主室中，内加磷酸缓冲液（pH 5.5）100 μmoles，电子受体浓度同上述同位素试验一样，以水为对照，总体积1.5 ml。中央井加KOH（20%）或水0.2 ml，于30℃，测定一小时内种子耗O2量或CO2释放量。

（4）丙酮粉的制备和酶液的提取。见前报道（施教耐等，1965），l0g种子加15 ml EDTA（0.3 mol/L）和磷酸钾（0.1 mol/L）缓冲液（pH 8.2）研碎，缓缓加入100 ml用干冰冷却的冷丙酮（-15℃～20℃），用布氏漏斗迅速抽气过滤，再用40 ml冷丙酮洗三次，抽干，在盛P2 O5的真空干燥器中干燥，于低温（-20℃）下保存。制备酶液时，按10 g鲜组织加25 ml EDTA（0.0015 mol/L）和磷酸钾（0.01 mol/L）的比例，研磨抽提丙酮粉，用纱布过滤，滤液用4 000转/分速度于低温离心20分钟，取上清液测定酶活力。(https://www.daowen.com)

（5）酶的测定。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶是根据NADP还原后在340 mμm处出现吸收峰，用日立EUP-2A型分光光度计测定。

（6）糖测定。lg鲜种子磨碎后，用80%热酒精提取4～5次，蒸去酒精，用水溶出残物，用蒽酮比色法（Fairbairn，1953）测定可溶性糖含量，用Roe的间苯二酚比色法测定酮糖。以可溶性糖-酮糖=醛糖（施教耐等，1965a）。