5.酶活力测定
1）各种酶液的制备
（1）固体曲：称取培养3天的相当于1克干曲的鲜曲，加35毫升水，于30℃左右浸泡1小时，离心5分钟（3 000转/分），上清液即为1∶35的固体曲酶抽提液。本文除特别说明外，固体曲酶抽提液，均指此种液体。
（2）液体曲：培养60小时的液体曲，离心5分钟（3 000转/分），上清液即为液体曲酶液。
（3）酶制剂：将酶制剂配成1%、0.5%或0.1%的水溶液。
2）酶活力测定方法
（1）CMC酶解活力。
①CMC糖化力（以还原糖表示）。
A法：0.5毫升适当稀释的酶液，加2毫升0.625%羧甲基纤维素钠盐溶液[2]（简称CMC溶液，原品由上海长虹塑料厂出品，黏度（PM6）300～600厘泊。），50℃水浴中反应30分钟，加2.5毫升DNS试剂终止反应，煮沸5分钟，于540毫微米波长下比色，由比色读数换算成每毫升酶液作用半小时后产生的葡萄糖毫克数。
B法：基本上按Mandels的方法［10］，0.5毫升适当稀释的酶液，0.5毫升1%CMC溶液（溶于0.05 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH 5.0），50℃反应30分钟，加1毫升DNS试剂煮沸5分钟，于540毫微米波长下比色，由比色读数换算成每毫升酶液作用半小时后产生的葡萄糖毫克数。规定在上述条件下，每分钟产生1微克分子葡萄糖为1个酶活力单位。
②CMC液化力［11］（以黏度表示）。
2.5毫升适当稀释的酶液，加2.5毫升0.2 mol/L pH 5.0的醋酸缓冲液和5毫升1%CMC溶液，30℃反应10分钟，用黏度计测定并求出反应前后反应液的比黏度，按下式求出CMC酶活力：
（2）滤纸酶解活力。
①滤纸崩溃法（静止法）。
试管（15厘米×1.5厘米）内加4毫升酶液（固体曲酶提取液或液体曲原液）及1毫升柠檬酸（0.05 mol/L）-磷酸氢二钠（0.1 mol/L）缓冲液（pH 4.8），再投入一张1厘米×3厘米新华1号（快速）滤纸，50℃静止保温1小时后，观察滤纸崩溃程度。
②滤纸糖化力。(https://www.daowen.com)
A法（静止法）：吸取前法所得反应液0.5毫升，用DNS试剂定糖，扣去空白后，换算成每毫升反应液在1小时产生的葡萄糖毫克数（简称滤纸糖）。
B法（静止法）：基本上根据Mandels的方法［10］，试管（15厘米×1.5厘米）中加0.5毫升酶液及1毫升柠檬酸缓冲液（0.05 mol/L，pH 4.8），试管底部预先竖放一张卷曲的1厘米×6厘米的Whatman 1号滤纸（约重50毫克），50℃，静止保温1小时，用DNS试剂法测定形成的还原糖，扣去空白后，换算成每毫升酶液产生的葡萄糖毫克数（简称滤纸糖）。
C法（震荡法）：反应液同前述B法，但反应在震荡器上震荡（80～90次/分，振幅5厘米）进行。
③滤纸崩溃法（震荡法）。
25毫升容量瓶中注入4毫升酶液（酶制剂为1%浓度）及1毫升柠檬酸（0.05 mol/L）-磷酸氢二钠（0.1 mol/L）缓冲液（pH 4.8），并放入2张1厘米×l厘米Whatman 1号滤纸，于震荡器上震荡（80次左右/分，振幅5厘米），观察二张滤纸全部崩溃成糊状所需的时间。再按外山法［12］计算活力单位。
（3）棉花糖化活力［10］。
带塞试管（11厘米×1.5厘米）中，加1.0毫升酶液（不稀释）和1毫升柠檬酸缓冲液（0.05 mol/L，pH 4.8），及50毫克脱脂棉，于50℃水浴中，静止保温24小时，用DNS法测定形成的还原糖，扣去空白后，换算成每毫升酶液作用（24小时）产生的葡萄糖毫克数（简称棉花糖）。
（4）果胶酶活力。
①黏度法：0.5毫升1%浓度的酶制剂溶液，加4.5毫升水及5毫升1%的果胶溶液（苹果果胶，B.D.H产品，溶于0.2 mol/L，pH 5.0的醋酸缓冲液中），30℃恒温水浴中反应10分钟，测定反应前后黏度的变化，求出相对黏度和比黏度，换算成每毫升酶液的活力单位数。本法不适用液依曲酶液。
②还原糖法：2毫升适当稀释的酶液，加0.5毫升0.5%的多聚半乳糖醛酸溶液（Light产品，溶于0.1 mol/L，pH 4.5醋酸缓冲液中），30℃，反应30分钟，用DNS法测定形成的半乳糖醛酸，扣去酶液空白，换算成每毫升酶液（半小时）作用形成的半乳糖醛酸毫克数。
（5）半纤维素酶［13］。
以玉米芯中提取的半纤维素为底物，用甲基间苯二酚法测定酶解形成的木糖，换算成每毫升酶液作用（半小时）产生的木糖毫克数。
（6）淀粉酶活力。
0.5毫升适当稀释的酶液，加2毫升1%的可溶性淀粉（溶于0.02 mol/L，pH 4.8醋酸缓冲液中），50℃反应30分钟，用DNS法测定形成的还原糖，扣去空白，换算成每毫升酶液作用（半小时）形成的葡萄糖毫克数。
（7）蛋白酶［13］。
以酪蛋白为底物，用福林试剂测定形成的酪氨酸，规定每分钟形成1微克酪氨酸为1个活力单位（u）。
