3.方法
1)葡萄糖母液的分离
(1)活性炭层析分离。颗粒状活性炭“769”20克,活化后装柱,柱2.5×28厘米[1]。葡萄糖母液上样量20毫升。用6 000毫升蒸馏水洗脱,使柱中单糖全部洗脱下来。再用1 000毫升7%酒精洗脱,流速5毫升/分钟左右。水洗脱液中含总糖约9克,酒精洗脱液中含总糖约185毫克,非还原糖80毫克。水洗脱液和酒精洗脱液分别浓缩,配成适当浓度,作纸谱分离和诱导活性测定。
(2)纸谱分离和检定。用Whatman 1号滤纸(25×58厘米)点样,溶剂为正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5),于室温(20℃左右)下行7天,晾干后,用苯胺一二苯胺[2]试剂于100℃左右显色检糖。
2)槐豆荚提取液制备方法
20克洗净晾干的槐豆荚(Sophora japonica L.),用200毫升热水浸泡,在组织捣碎机中捣碎,于沸水浴中提取20分钟,过滤。在200毫升滤液中,加0.125毫升浓硫酸,沸水浴中水解1小时,加0.7克左右的Ba(OH)2中和至pH 6.0左右。过滤,得到橙黄色滤液,即为槐豆荚提取液。(https://www.daowen.com)
3)糖含量测定
用酚-硫酸法测定总糖(Michel等,1956),用DNS法测定还原糖(Sumner,1949),非还原糖为总糖与还原糖之差。
4)诱导活性测定
2.45毫升洗涤菌丝体,加2.45毫升无机盐培养基及0.1毫升配成适当浓度的葡萄糖母液,或槐豆荚提取液,或槐糖及葡萄糖,于30℃左右,振荡培养,间隔不同时间,测定滤液中的纤维素酶活力,方法详见前文报道(朱雨生等,1978b)。
5)纤维素酶活力测定
以羧甲基纤维素钠盐(黏度300~600厘粕,上海长虹塑料厂产品)为底物,测定CMC酶活力(即Cx酶),作为纤维素酶活力的代表(朱雨生等,1978)。