一、材料和方法

一、材料和方法

（1）菌种：拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii Rafai）EA3-867和N2-78是分别从野生型菌株1096（又称AS 3.3112）和木-3诱变得到的高产变异株。

（2）试剂：纤维素粉、槐糖、葡萄糖、CMC等同前文（朱雨生等，1978a）。

（3）液体培养方法。

①稻草粉培养基成分（%）：稻草粉1，麸皮0.5，（NH4）2SO4 0.2，KH2PO4 0.1，CaCO3 0.1，葡萄糖母液1。菌丝接种，30℃旋转式摇床（104次/分）培养60小时。

朱雨生，中国科学院上海植物生理研究所

1978年5月8日收到。此文发表于1978年“植物生理学报”4卷2期143-151页。

②纤维素粉培养基成分（%）：纤维素粉0.5，（NH4）2SO4 0.14，KH2PO4 0.2，尿素0.03，MgSO4·7H2O 0.03，CaCl2 0.03，蛋白胨0.1；每升含微量元素：FeSO4·7H2O 5毫克，MnSO4·H2O 1.56毫克，ZnCl2 1.67毫克，CoCl2 2毫克，pH 5.3。500毫升三角瓶中装入100毫升培养基，孢子悬浮液接种，30℃左右，往复式摇床（108次/分）培养。

③甘油培养基：上述纤维素粉培养基中纤维素粉改成甘油（0.6%），其余相同。(https://www.daowen.com)

（4）酶活力测定方法。

①CMC酶活（Cx）：详见前文（朱雨生等，1978a），除表中特别指出外，一般酶测定温度为40℃。在规定的反应系统中每产生0.5毫克葡萄糖为1个活力单位。

②滤纸崩溃、滤纸糖（F.P.）及棉花糖（C1）：见前文（中国科学院植物生理研究所纤维素酶组等，1978）。

（5）糖、蛋白和生长测定：参照前文的方法（朱雨生等，1978a）。

（6）洗涤菌丝体静止细胞诱导培养方法：详见过去的报道（朱雨生等，1978 b）。在不同菌种洗涤菌丝体纤维素酶凝胶电泳的试验中，500毫升三角瓶中装入100毫升甘油培养基，接入不同菌种孢子悬浮液，每个菌种各接二瓶，培养二天后的洗涤菌丝体合并，于100毫升诱导培养基中加3×10-4 mol/L槐糖，恒温（27℃左右）震荡培养24小时，于3号细菌漏斗抽滤，滤液冷冻干燥即为胞外酶制剂。菌丝体用0.01 mol/L，pH 5磷酸缓冲液多次洗涤后，用超声波发生器（H60025型），于冰浴中声击处理20分钟（300 mA），低温离心（3 000 rpm，20分钟），所得上清液经冷冻干燥即成胞内酶制剂。

（7）酶组分的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离法：参照前文的方法（朱雨生等，1978a）。每管注样量为粗酶制剂5毫克，电泳2～4小时（电流为2安培/管），氨基黑染色，用本所电子室自制的凝胶电泳扫描仪绘制蛋白带峰形图。凝胶段酶活分布测定是在未染色的凝胶上（电泳毕），从前沿蛋白带为起始点，每隔3毫米切割一段，于1毫升柠檬酸（0.05 mol/L）-磷酸盐（0.1 mol/L）缓冲液（pH 4.8）中研磨浸提，取清液测定C1、Cx、FP和蛋白含量。