2.方法

（1）洗涤菌丝体纤维素酶诱导方法：参照前文的方法（朱雨生等，1978b），500毫升三角瓶中盛100毫升洗涤菌丝体，槐糖浓度为10-4 mol/L，诱导温度为28℃。

（2）纤维素酶测定方法（C1酶、Cx酶和β-葡萄糖苷酶）：见前文（朱雨生等，1978a）。

（3）蛋白质、RNA测定方法：可溶性蛋白按Lowry法（1951）测定。RNA用甲基间苯二酚试剂测定（Chargaff，1955）。

（4）RNA抽提分离。

①抽提：500毫升左右经槐糖诱导6小时的菌丝体，用3号细菌漏斗抽滤后，迅速用冷的0.01 mol/L Tris-HCl（pH 7.5）洗涤，立即转移到预冷的100毫升0.01 mol/L Tris-HCl（pH 7.5）抽提缓冲液内（内含S.D.S.0.5%，二乙基焦碳酸钠1%，或肝素0.05%），菌丝体浓度1%左右（以干重计），在组织捣碎机中低温捣碎3分钟（1 200转/分），立即加等体积酚液（苯酚∶氯仿∶异戊醇=66∶33∶1），抽提三次，水相加醋酸钾，使其浓度成2%，再加2.5倍体积-20℃的无水酒精沉淀RNA，用乙醇-0.2 mol/L NaCl（2∶1）溶液洗涤沉淀，离心得到总RNA。

吴永强，朱雨生，陈薇，高锦华，费锦鑫，中国科学院上海植物生理研究所(https://www.daowen.com)

1979年2月27日收到。此文发表于1979年“植物生理学报”5卷4期335-341页。

*本工作在沈善炯教授指导下完成，还得到中国科学院上海细胞生物所李文裕等同志帮助，特此致谢.

②Poly（A）-RNA的分离：基本上按Aviv等（1972）的亲合层析法分离。总RNA样品溶于0.0l mol/L Tris-HCl（pH 7.5）-0.5 mol/L KCl缓冲液中，加入预先用同样缓冲液平衡过的寡聚（dT）-纤维素柱（上海试剂二厂产品）中，洗脱采用三步（升温）法或二步法。三步法是①先用0.0l mol/L Tris-HCl（pH 7.5）-0.5 mol/L KCl（0～2℃）洗脱；②再升温到54℃，用同样缓冲液洗脱；③最后在54℃改用0.01 mol/L Tris-HCl（pH 7.5）溶液洗下含Pol（yA）的RNA（上海实验生物所三室等，1977）。二步法的第一步用0.01 mol/L Tris-HCl（pH 7.5）-0.5 mol/L KCl洗脱，而后直接用中性重蒸馏水洗脱Poly（A）-RNA（李文裕等，1978）。

③RNA电泳：按Loening法（1967）分离，聚丙烯酰胺凝胶浓度为3%，管子6.7×0.56厘米，加样100微克左右。缓冲液含（克/升）：Tris 4.85，醋酸钠2.72，EDTA 0.29，pH 7.4。每管电流为5毫安。冰浴中电泳2小时左右，0.5%甲烯蓝染色，7%醋酸中退色。用CS-900岛津双波长色层扫描仪扫描。