菌丝体Pol（yA）-RNA的分离

100毫升菌丝体的总RNA（约700 A260单位）溶于100毫升0.01 mol/L Tris-HCl（pH 7.5）-0.5 mol/L KC1中，经寡聚（dT）-纤维素柱（13×1.2厘米左右）三步洗脱层析，可以得到三个峰：峰Ⅰ、峰Ⅱ和峰Ⅲ（见图3），其中A260/A280分别为2.24、2.14和1.46。峰Ⅰ是不吸附在柱上的RNA，经聚丙烯酰胺凝胶电泳检定，主要是r-RNA，其含量最高，得率占总RNA的98%以上。峰Ⅱ是吸附不紧密的RNA。低离子强度下洗脱下来的峰Ⅲ是Pol（yA）-RNA，得率占总RNA的1.06%。

图3　N2-78菌丝体经槐糖诱导的RNA的寡聚（dT）-纤维素柱层折分离图（三步法）

图4是总RNA经二步洗脱得到的层析图，有二个峰：峰Ⅰ和峰Ⅱ，A260/A280分别为2.30和1.63。其中峰Ⅱ按文献报道（李文裕等，1978）是Pol（yA）-RNA，占总RNA 0.96%。用三步法或二部法洗脱，都表明Pol（yA）-RNA约占总RNA的1%。

图3和图4中的Poly（A）-RNA经透析、冷冻干燥后，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳检定，得到较为单纯的区带（见图5），位置与图2中的mRNA位置接近。

图6是对照（不加槐糖）和经槐糖诱导6小时的总RNA样品的寡聚（dT）-纤维素柱层析图（二步法洗脱）。可见，经槐糖诱导后的Poly（A）-RNA含量显著增加。(https://www.daowen.com)

图4　N2-78菌丝体经槐糖诱导的RNA的寡聚（dT）-纤维素柱层析分离图（二步法）

图5　Poly（A）-RNA的凝胶电泳扫描图

峰Ⅱ为二步洗脱法得到的Poly（A）-RNA，峰Ⅲ为三步洗脱法得到的Poly（A）-RNA。

图6　槐糖诱导和对照总RNA经寡聚（dT）-纤维素柱的层析图