淋巴细胞分离技术

一、淋巴细胞分离 技术

淋巴细胞分离技术是细胞免疫实验最基本的技术。分离外周血单个核细胞(包括淋巴细胞和单核细胞)是分离T、B细胞及其亚群的第一步,常用的方法如下。

(一)密度梯度离心法

比较常用的是由聚蔗糖和泛影葡胺(Ficoll分离液)组成的淋巴细胞分离液。可在离心后收集相应层次的外周血单个核细胞(PBMC,包括淋巴和单核等细胞)。进一步的分离可以利用单核细胞在37 ℃和Ca2+存在时,能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,从单个核细胞悬液中除去单核细胞,从而获得纯淋巴细胞群。

(二)基于免疫技术的淋巴细胞分离法

单克隆抗体可以识别淋巴细胞表面的标志分子。将这些单克隆抗体事先吸附在免疫磁珠上,加至细胞悬液中,单克隆抗体与相应的淋巴细胞表面标志反应后,将反应管置于磁场中,洗去未结合磁珠的细胞即可获得高纯度的目的细胞。也可用流式细胞技术对淋巴细胞亚群进行分离。