补体的检测及应用
补体（complement）是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的蛋白质，包括补体的固有成分、补体的调节蛋白、补体受体等30多种成分。一般情况下，处于未激活状态。不耐热，活化后具有酶活性，可介导免疫应答和炎症反应。可被免疫复合物或微生物所激活，导致病原微生物裂解或被吞噬。
补体测定就是指测定总补体溶血活性及量的变化，用于检测各种急性炎症，检测方法有50%溶血法、免疫比浊法、酶联免疫吸附试验、单向免疫扩散法等。
（一）血清总补体溶血活性（CH50）测定
溶血素（抗绵羊红细胞抗体）与绵羊红细胞接触后发生特异性结合，此时可激活补体（经典途径），从而使绵羊红细胞溶解。其溶血程度与补体量成正比，溶血程度在30%～70%的范围内，补体的用量稍有变动即能影响溶血程度。在50%溶血（CH50）时，其溶血的程度与补体量的关系最敏感，近似直线关系，故以50%溶血度作为反应的终点指标，所测补体量较为准确，由于绵羊红细胞与溶血素结合激活补体是经典C1途径，所以此反应反映了总补体的活性。
本法测定补体的正常参考值为50～100 U/mL。在急性炎症、感染、组织损伤（如风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、伤寒、Reiter综合征和多发性关节炎）、肿瘤、骨髓瘤等时，常可见补体含量升高，使CH50值偏高；低补体血症多见于与免疫有关的疾病，系病程中免疫应答消耗了补体所致，如急性肾小球肾炎、膜增生性肾小球肾炎、系统性红斑狼疮活动期、类风湿性关节炎等。
具体检测中应注意下列事项。
1.待测标本 应无溶血、无污染、无乳糜血。实验器材应清洁。
2.缓冲液、致敏羊红细胞 均应新鲜配制。试验中吸取2%SRBC时注意不断轻摇。
3.受检血清 必须新鲜，如放置2h以上，会使补体活性下降。
4.补体的溶血活性 受多种因素的影响，如绵羊红细胞浓度及溶血素的量等。当每一致敏红细胞吸附的补体分子低于100时，红细胞溶血程度随细胞浓度的增加而减少；当用高浓度抗体致敏时，溶血程度随细胞增加而增加。红细胞浓度增加一倍，可使50%溶血补体量增加25%左右。故在配2%SRBC和2U的溶血素时，均应尽可能标准化和准确。钙、镁离子的存在可稳定溶血系统，但含量过多时，反而抑制溶血反应。因此，须对反应的各个环节加以控制。(https://www.daowen.com)
（二）溶血试验
动物接受异种细胞注射而免疫，于血清中产生特异性抗体（即溶血素），此红细胞与相应抗体特异性结合，在电解质存在时能发生凝集，若再有补体参与，红细胞则被溶解，称溶血反应（hemolytic）。此反应的直接用途是作为指示系统测定血清总补体活性或溶血素的效价，也可检测另一反应系统的抗原或抗体，即补体结合试验。溶血：液体呈红色透明。不溶血：呈红细胞混悬液。
检测中的注意事项如下。
（1）补体在体外极易衰变，血清分离后应及时使用，最好在当日用完。必须保存时采用小量分装的办法，置-70 ℃下可保存数月，避免反复冻融。冻干制品可长期保存，但其活性都不同程度地比新鲜血清降低。所以检测补体活性的血清标本和作为补体试剂的血清必须新鲜。
（2）溶血素即抗绵羊红细胞抗体，多是以绵羊红细胞免疫家兔而得到的兔抗血清。一般没有必要进一步提纯抗体，但在试验前需先经过56 ℃ 30 min或60 ℃ 3 min以灭活补体。
（3）由于补体溶血试验及补体结合试验均是比较精密的试验，其结果与溶血素的效价有关，所以试验需要滴定溶血素效价。在制备抗血清的过程中，进行动物采血前和分离抗血清后也需要滴定溶血素效价。
（三）补体结合试验
补体结合试验（complement fixation test）是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。参与本反应的5种成分可分为2个系统：①待检系统：已知抗原（或抗体）和待检的抗体（或抗原）。②指示系统：绵羊红细胞及其相应溶血素。待检的抗原、抗体和先加入的补体作用后，再加入指示系统，若不出现溶血，则为补体结合阳性，表示待检系统中的抗原与抗体相对应，两者特异性结合后固定了补体，指示系统无补体结合，故不发生溶血。反之，若出现溶血现象，则为补体结合阴性，表示待检的抗原抗体不对应或缺少一方，不能固定补体，游离补体被后加入的指示系统固定，导致绵羊红细胞溶解。因此，补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
本反应敏感性、特异性均较高，可用于检测某些病毒病、立克次体病、梅毒病等。由于参与反应的各种成分之间要求有适当量的关系。因此做本试验之前必须通过一系列预备试验来确定补体、溶血素、抗原或抗体的使用量。
（江华 王可）