三、实验内容
（一）材料与仪器
1.仪器
主要有分析天平、台式离心机、可见分光光度计、剃须刀、酒精棉球、镊子、5 mL注射器、10 mL试管、扩口器、移液枪（1 mL、5mL）、恒温水浴锅等。
2.材料
主要有阿司匹林片剂、水杨酸对照品、肝素钠、75℅乙醇、混合试剂（将40 g升汞溶于120 mL蒸馏水中，加120 mL 1 mol/L盐酸、40 g硝酸铁搅拌溶解，加蒸馏水至1000 mL）等。
3.实验动物：家兔（2.5～3 kg），实验前禁食12 h，不禁水。
（二）实验部分
1.水杨酸血药浓度标准曲线的制备：准确配制水杨酸水溶液贮备液（0.5 mg/mL，4℃保存），分别吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、8.0 mL、12.0 mL和32.0 mL置50 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，分别得5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL和320 μg/mL的标准溶液。精密吸取以上标准溶液各0.5 mL，分别加入1.0 mL家兔空白血浆（此时对应的血药浓度分别是2.5 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL和160 μg/mL），加6.0 mL混合试剂，混匀，离心，取上清液于540 nm测定吸光度。以吸光度与水杨酸血药浓度进行线性回归，即得水杨酸血药浓度标准曲线。以1.0 mL空白血浆加0.5 mL蒸馏水，加4.0 mL混合试剂，按同法处理做空白对照，于540 nm测定吸光度。
2.相对回收率：精密吸取低、中、高三种浓度的水杨酸标准溶液（10 μg/mL、40 μg/mL、160 μg/mL）0.5 mL，按“水杨酸血药浓度标准曲线的制备”程序处理，测定其吸光度，代入水杨酸血药浓度标准曲线，求得相应的理论浓度，再与真实血药浓度相比，即可求得相对回收率。
3.血药浓度测定：给药前先用水湿润心脏部位兔毛，剪去兔毛，将兔毛置于盛水烧杯中。家兔由两位同学固定，根据剑突位置确定心脏采血位置，从剑突开始朝颈部方向1～1.5 cm，再偏左约0.5 cm位置插入注射针头，如果观察不到回血，则稍用力回抽注射器。采血体积2.0～2.5 mL，注入预先用肝素钠荡洗过的离心管中。按0.1 g/kg口服给药（一般按1片/只服药）。给药时，两人协作，一人坐好，将兔躯干体夹于两腿之间，左、右手握住双耳和前肢，固定头部并使兔嘴成上仰姿态；另一人将开口器横放于兔口中，将舌压在开口器下面，固定开口器，用镊子夹住药片，从开口器洞孔送入咽部，注射器取适量水冲服。记录喂药时间，给药后于15 min、30 min、60 min、90 min、150 min、210 min、270 min和330 min心脏取血，将血液立即注入预先肝素化的离心管中，于37℃±0.5℃水浴上保温2 h，离心10 min（3000 r/min），吸取1.0 mL血浆，加入0.5 mL蒸馏水、加4.0 mL混合试剂，同“水杨酸血药浓度标准曲线的制备”步骤，进行血药浓度测定。
【注意事项】
（1）动物实验中为了防止实验人员被动物抓伤、咬伤以及动物毛发吸入，实验人员应穿上白大褂，戴好口罩、手套。
（2）家兔在给药2 h后，可适当给予饲料；实验全程不禁水。
（3）必须对采血器材和盛血液试管事先进行肝素化处理，以免血液凝固成团。
（4）处理完的血浆样品因含有污染性物质汞，必须回收并进行特殊处理。