方法适用性建立
8.1 菌悬液制备、菌悬液数量测定同预试验方法。
8.2 需氧菌计数方法适用性试验。
8.2.1 试验组。分别取2%苯酚甘油1∶10的供试液2 mL,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜100 mL,分别加入金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,培养、计数。
8.2.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。
8.2.3 供试品对照组。取2%苯酚甘油1∶10的供试液2 mL,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜100 mL,薄膜过滤后取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,进行培养、计数。
8.2.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基替代样品,薄膜过滤后取出滤膜,面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上,进行培养、计数。
8.3 霉菌和酵母菌总数方法适用性试验。
8.3.1 试验组。分别取2%苯酚甘油1∶10的供试液2 mL,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜100 mL,分别加入白色念珠菌、黑曲霉0.1 mL菌悬液(小于1 000 cfu),取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,培养、计数。
8.3.2 菌液对照组。用菌悬液替代试验样品溶液,进行薄膜过滤,测定阳性对照菌数。
8.3.3 供试品对照组。取2%苯酚甘油1∶10的供试液2 mL,加到pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL中,进行薄膜过滤,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,每膜100 mL,薄膜过滤后取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,进行培养、计数。
8.3.4 阴性对照组。用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基替代样品,薄膜过滤后取出滤膜,面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上,进行培养、计数。
计数方法适用性试验结果见表6。
表6 计数方法适用性试验
注:-表示平板无菌落生长。
8.4 金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌方法适用性,按预试验方法可以检出目标菌,方法可行。