液基细胞制片法

一、 液基细胞制片法

液基细胞制片法也称为薄层液基细胞学检测技术,具有收集细胞量多、背景干净清晰、细胞分布均匀、染色效果良好等优点,避免在制片的过程中出现人为因素干扰,从而提高诊断的准确性(主要有模式及沉降式两种制片方法)。目前大部分医院都采用液基细胞制片技术。

(一)沉降式液基细胞学制片方法

(1)充分混匀振荡使标本中的细胞分布均一。

(2)去除血凝块,组织碎块和黏液(注:去除血凝块和组织碎块这一步非常关键,否则可能造成吸取管堵塞,可以利用纱布之类的东西过滤标本。勿丢弃血凝块可留作细胞块包埋)。

(3)放入离心机,600 g的转速离心10分钟。

(4)倒去上清液,保留下层细胞沉积物。

(5)加入30 mL CytoRichTM红色固定液。

(6)振荡后静置30分钟。

(7)放入离心机,600 g的转速离心10分钟,倒掉上清液并充分振荡。

(8)如果看不到明显的细胞块,加入10 mL缓冲液,振荡后全部转移至12 mL离心管内。

(9)如果看见有明显的细胞块,吸取1~5滴转移至12 mL离心管内(细胞太多易重叠,需稀释),加入10 mL缓冲液。

(10)放入离心机,600 g的转速离心5分钟,倒去上清液并充分振荡。(https://www.daowen.com)

(11)在玻片架上与离心管对应的位置放上玻片,检查试剂瓶内试剂剩余量,将吸液管与对应的试剂瓶正确连接,运行制片程序。

(12)制片结束后移去玻片上的沉降室,迅速将玻片转移至无水乙醇里,随后放入二甲苯进行透明,封片(注:沉降室移去后,玻片应及时放入无水乙醇内,不能暴露在空气中,影响制片效果。染色结束后,应及时封片,以免在乙醇中浸泡过久造成褪色)。

(二)模式液基制片方法

(1)将标本放入30 mL清洗液中涮洗(若所取标本含血较多,可加入含10%冰醋酸的消化液20~30 mL),1 500~2 000 r/min振荡10分钟。

(2)离心:1 500~2 000 r/min离心5~10分钟,弃去上清液,观察细胞层,若肉眼仍可见血或黏液则重复步骤(1)。

(3)弃去上清液后将沉淀倒入盛有细胞保存液的标本瓶中。

(4)将标本瓶静置15分钟后,根据程序要求进行制片。

(三)对于特殊标本的处理

(1)含血液较多的标本处理流程(标本主要为穿刺标本、血性胸腔积液):① 标本中加入含10%冰醋酸的清洗液(或LCT红色固定液),振荡5分钟;② 离心机中离心(2 000 r/min);③ 取出标本后观察。如仍含血较多,去除上清液后,重复上述步骤。

(2)含黏液较多的标本处理流程(标本主要为痰液、灌洗液):① 标本中加入消化液(每15 mL 1~2滴),振荡15~20分钟;② 纱布过滤后,放入离心机中离心(2 000 r/min);③ 去除上清液后加入固定液。

(3)标本处理过程中,如果有血凝块勿丢弃,可以将血凝块直接包埋制作细胞块。