五、注意事项
1.玻片的清洗：新玻片常有游离碱质，因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min，再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗，必要时再置于95%乙醇中浸泡1h，然后擦干或烤干备用。
2.使用载玻片时只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
3.因为血液特别是骨髓纤维蛋白原含量较高，易于凝固，因此推片要及时并且在空气中快速摇动使之干燥。
4.推片速度应该适中，推片与载玻片的角度应呈30°～45°角。速度越快，角度越大，涂片就会越厚，反之则越薄。
5.骨髓中含骨髓小粒和脂肪，有核细胞数量较多，较血液黏稠，推片时角度应略小（推片与载玻片之间以30°为宜），速度也要稍慢，避免涂片过厚影响细胞形态观察。
6.涂片制好后最好立即固定染色。如不能立刻染色，可用甲醇先行固定，以免细胞溶解和发生退行性变。
7.涂膜未干透时，细胞尚未牢固附着在玻片上，在染色过程中容易脱落，因此必须充分干燥后再进行染色。
8.滴加在涂片上的染液不能过少，以防染液蒸发产生沉淀影响染色效果。
9.冲洗时不能先倒掉染液，直接以流水冲洗，防止染料沉着；冲洗时间也不宜长。
10.如果染色过淡，可以复染，染色过深可用20%盐酸甲醇溶液脱色。
11.pH值对染色有一定的影响。细胞各成分均由蛋白质构成，由于蛋白质是两性电解质，所带电荷随溶液的pH值不同而不同，在偏酸性的环境中正电荷增多易与伊红结合，染色偏红色；在碱性环境中负电荷增多易与亚甲蓝或天青结合，染色偏蓝色。因此细胞染色对H+浓度十分敏感。
附
一、血细胞发育成熟的规律
血细胞在成熟分化过程中，其形态和大小的变化基本有一个共同规律：
1.细胞体积
随着血细胞的发育成熟，一般胞体逐渐由大变小，但巨核细胞系则由小变大，原始粒细胞至早幼粒细胞也由小变大。
2.细胞核
大小：由大变小，但红细胞系例外。成熟红细胞的细胞核消失。形状：由圆形变为不规则形，粒细胞的细胞核呈分叶状，淋巴细胞与浆细胞系变化不明显。染色质：由疏松逐渐变为紧密。核膜：由不明显变为明显。核仁：由有变无。清晰的核仁是原始幼稚细胞的重要标记。颜色：呈淡蓝色，随着细胞的成熟而消失。
3.细胞质
量：由少变多。颜色：由深蓝变浅蓝，见于淋巴细胞和浆细胞，红细胞和粒细胞的细胞质逐渐变成橙红色和粉红色。颗粒：一般由无到少并逐渐增多。粒细胞由少量的嗜天青颗粒逐渐变成大量的中性、嗜酸性和嗜碱性颗粒。核浆比例：由大变小（如图1.2.6-2，见彩插）。
二、骨髓增生度分级标准
全面观察骨髓涂片成熟红细胞与有核细胞的大致比例，以确定增生度。通常分为五级（如表1.2.6）。(https://www.daowen.com)
表1.2.6 骨髓增生度分级标准
三、正常骨髓细胞学特点
1.骨髓增生程度为增生活跃。
2.粒系细胞占有核细胞的40%～60%，其中原粒细胞数量＜2%，早幼粒细胞数量＜5%，中幼粒细胞和晚幼粒细胞数量均＜15%，杆状核中性粒细胞的数量高于分叶核中性粒细胞，酸性粒细胞数量＜5%，碱性粒细胞数量＜1%，细胞形态染色基本正常。
3.红系细胞占20%，其中原红细胞数量＜1%，早幼红细胞数量＜5%，中幼红细胞和晚幼红细胞各占10%，细胞形态颜色基本正常。成熟红细胞大小、形态、染色基本正常。
4.粒红比值（M∶E）为2∶1～4∶1。
5.淋巴细胞约占20%，小儿的淋巴细胞含量可达到40%，均为成熟淋巴细胞，原始淋巴细胞罕见，幼稚淋巴细胞偶见。
6.单核细胞含量＜4%，原始单核细胞罕见，幼稚单核细胞偶见。
7.浆细胞数量＜2%。
8.巨核细胞通常在1.5cm×3cm的骨髓涂片上可见到7～35个，多为成熟巨核细胞。
另外，涂片中可见少量网状细胞、内皮细胞和组织嗜碱细胞。这些细胞虽然所占比例很低，却是骨髓中特有的细胞，可用于判断骨髓穿刺的质量。
四、染色液的配制
1.瑞氏染液的配制
称取瑞氏染料1g，放入研钵中，逐渐加入600mL甲醇，并细细研磨，直至完全溶解，置棕色瓶中密闭保存。为了防止甲醇挥发可加入30mL甘油。新鲜配制的染料必须在常温下放置一定时间，待染料成熟后再使用。储存时间越久，染色效果越好。
磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）：磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000mL，塞紧瓶口贮存。可用新鲜蒸馏水代替。
2.吉姆萨染液的配制
称取吉姆萨染料1g加入66mL甘油（应先加少量甘油将染料进行研磨），混匀，56℃水浴溶解2h，再加入66mL甲醇充分混匀，装入棕色试剂瓶内密闭保存，过滤后使用。储存时间越久，染色效果越好。
3.吉姆萨-瑞氏染液的配制
吉姆萨染料0.03g，瑞氏染料0.3g，甲醇100mL。将2种染料置于研钵中细细研磨，逐滴加入甲醇，充分研匀后，倒入棕色瓶中置室温溶解后放置一定的时间后使用。
（于红娟）